雌二醇介导SIRT1-FOXO3a对成骨细胞自噬的作用和机制研究

• 作者: 周乾 唐烨 王惟达 蒋成明 蒋林
• 来源期刊: 中国骨质疏松杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 17β-雌二醇 沉默信息调节因子1 5′-单磷酸腺苷活化蛋白激酶 FOXO3基因编码的人类蛋白质 线粒体自噬
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1788-1796
• 页数: 9页
• 分类号: R681
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7108.2020.12.013

摘要

目的 探讨雌激素是否能通过增强SIRTl的活性进而对成骨细胞及其通路产生作用.方法 17β-雌二醇(17β-E2)作用于hFOB1.19成骨细胞24 h,应用荧光自噬检测试剂盒(MDC)检测成骨细胞自噬情况;应用蛋白免疫印迹技术检测自噬相关蛋白LC3的表达含量;应用蛋白免疫印迹技术检测AMPK、磷酸化的AMPK、SIRTl蛋白活性的影响;在17β-E2环境中,增强或抑制SIRTl的活性,通过电镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪观察细胞形态和关键蛋白质的改变;应用免疫印迹技术及实时定量PCR检测17β-E2/SIRT1/AMPK/FOXO3a对细胞自噬相关蛋白BCL-2、Bnip3、mTOR及凋亡相关蛋白caspase-3的影响.结果 17β-E2(10-8 mmol/L,10-6 mmol/L)增加成骨细胞的自噬,成骨细胞内LC3II蛋白活性增加;随着17β-E2浓度的增加,SIRTl蛋白表达量增加,且活性增强;17β-E2增加磷酸化AMPK的水平,且AMPK可以增加成骨细胞内SIRTl的活性;SIRTl激动剂SRT1720及抑制剂Ex527可以干预17β-E2/SIRTl对成骨细胞细胞凋亡的负调节作用;应用激光共聚焦显微镜和透视电镜观察成骨细胞内17β-E2/SIRTl调节LC3蛋白,并发现SRT1720可增强成骨细胞内的双层膜结构的线粒体自噬小体的数量;介导SIRTl蛋白,17β-E2可以增加自噬相关蛋白Bcl-2和Bnip3的表达,减低mTOR的活性,增加FOXO3a活性.结论 SIRT1在17β-E2介导的成骨细胞自噬作用中起到关键作用;17β-E2可能通过AMPK/SIRT1/FOXO3a/mTOR通路介导成骨细胞自噬.