大肠杆菌分泌表达裂解性多糖单加氧酶发酵条件的优化

• 作者: 刘夫锋 安亚静 柴成程 路福平 郭宵
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 裂解性多糖单加氧酶 大肠杆菌 信号肽 分泌表达 发酵优化
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 31-37
• 页数: 7页
• 字数: 5255字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.022822

摘要

裂解性多糖单加氧酶(Lytic polysaccharide monooxygenases,LPMOs)是一种铜离子依赖型的氧化酶,可以降解生物质中的顽固多糖.因此,LPMOs在木质纤维素转化为生物燃料或其他有价值的寡糖方面得到了广泛的研究.该研究对来源嗜热毁丝霉的MtC1LPMO在大肠杆菌中进行了异源表达,首先研究了不同信号肽对重组蛋白表达的影响,结果表明PelB信号肽可以成功将MtC1LPMO分泌至细胞外,提高了MtC1LPMO的总可溶性蛋白含量.为进一步提高MtC1LPMO胞外表达量,对诱导时期、诱导剂浓度、诱导温度、发酵时间和乙醇浓度进行了优化.实验结果表明,在培养基OD600值达到0.9时,添加终浓度为0.5 mmol/L的IPTG和终体积分数为2％的乙醇,然后于30℃发酵16 h后重组MtC1LPMO的表达量最高,可溶性蛋白总含量为12.65 mg/L,为优化前的2.05倍.其中细胞外蛋白含量也达到了最高,为8.51 mg/L,细胞外比率为67.30％,以2,6-二甲氧基苯酚为底物在标准条件下测定的比活力为10.3 U/g.