基于Notch通路探讨缺氧对小胶质细胞IL-1β表达的影响

• 作者: 韩永丽 黎春常 丁洪光 黄林强 刘新强 陈胜龙 曾红科
• 来源期刊: 中华急诊医学杂志
• 关键词: 缺氧 小胶质细胞 Notch信号通路 OGD DAPT NICD IL-1 β 脑缺血-再灌注损伤
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1584-1589
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2020.12.015

摘要

目的 探讨缺氧后小胶质细胞Notch信号通路是否激活,及其对IL-1 β表达的影响.方法 将BV-2小胶质细胞分为对照组、缺氧无糖培养组(oxygen glucose deprivation,OGD组)、及缺氧无糖培养+10 μmol/L DAPT组(DAPT组);对照组细胞正常培养,OGD组、DAPT组缺氧培养4h(含3％02,5％CO2,92％N2培养箱中培养)后在正常培养箱中复氧24 h.先用CCK8分析10 μmol/L DAPT对BV-2小胶质细胞活性的影响;Western blot检测各组BV-2小胶质细胞中活化的Notch信号通路下游蛋白NICD的表达,以及免疫荧光法、RT-PCR、Western blot检测各组BV-2小胶质细胞IL-1 β的表达.数据采用单因素方差分析,用LSD-t法进行组间两两比较,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 CCK8检测OGD组及DAPT组的OD值分别为:0.269±0.013、0.265 ± 0.025(P＞0.05);表明10 μmol/L DAPT 对BV-2小胶质细胞活性无影响.Western blot 提示:与对照组比较,OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞NICD蛋白表达明显增加;与OGD组比较,DAPT抑制Notch信号通路后BV-2小胶质细胞NICD蛋白表达明显减少(对照组:0.632 ± 0.065,OGD组:1.276 ± 0.049,DAPT组:0.938 ± 0.049,P＜0.05).免疫荧光提示:对照组BV-2小胶质细胞少量表达IL-1 β;OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1 β的表达明显增加;与OGD组比较,DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β的表达明显减少.RT-PCR提示:与对照组比较,OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1 β mRNA表达明显增加;与OGD组比较,DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1 β mRNA 表达明显减少(对照组:1.000±0.173,OGD 组:2.741 ±0.207,DAPT组:1.762 ±0.177,P＜0.05).Western blot提示:与对照组比较,OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞IL-lβ蛋白表达明显增加;与OGD组比较,DAPT组BV-2小胶质细胞IL-lβ蛋白表达明显减少(对照组:0.422 ±0.030,OGD 组:1.236 ±0.143,DAPT 组:0.730 ± 0.047,P<0.05).结论 缺氧可激活小胶质细胞Notch信号通路,抑制Notch信号通路可减少缺氧小胶质细胞IL-1 β的表达.