食品检测用4种病原菌基因组试剂盒提取方法的比较与优化

• 作者: 朱丽萍 杨焕蝶 杨金玉 王易芬 陈相艳 陈蕾蕾
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 食源性病原菌 基因组提取 方法优化 特征毒力基因
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 分析与检测
• 页码范围: 246-253
• 页数: 8页
• 字数: 5655字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2020.04.031

摘要

目的:采用国产的天根细菌基因组提取试剂盒,制备具有自主知识产权的、达到国家核酸标准物质要求的食源性病原菌的基因组样品.方法:以4种食源性病原菌大肠埃希氏菌O157∶H7、单增李斯特氏菌、肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌为研究对象,首先使用进口OMEGA细菌基因组提取试剂盒和国产天根细菌基因组提取试剂盒提取4种病原菌的基因组,然后对国产试剂盒提取的基因组浓度和纯度较低的大肠埃希氏菌O157:H7、肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的基因组提取方法进行优化.最后对4种病原菌基因组的完整性和纯度进行琼脂糖凝胶电泳检测,并分别对4种病原菌的特征毒力基因进行PCR扩增验证.结果:通过方法优化,使用国产天根细菌基因组提取试剂盒提取的4种病原菌的基因组质量浓度均在50 ng/μL以上,A260/A280和A260/A230的值在1.7～2.0之间,基因组DNA条带完整,无RNA和蛋白污染,各菌株的特征毒力基因均为阳性.结论:通过基因组提取方法的优化,得到符合国家核酸标准样品要求的4种病原菌基因组样品,为后续大量制备核酸标准样品奠定了基础.