共表达分子伴侣PDI和转录因子Aft1对毕赤酵母表达人溶菌酶的影响

• 作者: 刘军 吴菁 李鑫 王儒昕 闫达中 陈园园 韩琴
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 人溶菌酶 分子伴侣 转录因子 共表达 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 124-130
• 页数: 7页
• 分类号: Q819
• 字数: 5521字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20190305-049

摘要

通过共表达分子伴侣二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)和毕赤酵母转录因子Aft1,提高重组人溶菌酶(human lysozyme,HLY)在毕赤酵母中的分泌表达水平.将构建的分子伴侣表达载体pG418-PDI和毕赤酵母转录因子Aft1表达载体pG418-Aft1线性化后,电击转化重组毕赤酵母KM71-HLY细胞,用含G418的平板筛选阳性转化子,得到共表达分子伴侣PDI和HLY,及共表达毕赤酵母转录因子Aft1和HLY的工程菌株KM71-HLY-pG418-PD和KM71-HLY-pG418-Aft1.摇瓶发酵分析共表达PDI和Aft1对HLY表达水平的影响.结果 表明,工程菌KM71-HLY、KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1经甲醇诱导均产生14.7 kDa HLY,发酵上清液在含溶壁微球菌平板上出现抑菌圈.在诱导表达前期,KM71-HLY-pG418-PDI、KM71-HLY-pG418-Aft1和KM71-HLY生长量无明显差别;70h后,KM71-HLY-pG418-PDI菌株和KM71-HLY-pG418-Aft1菌株生物量少于KM71-HLY,发酵最终生长量分别为KM71-HLY的92.8％与84.1％.KM71-HLY、KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1经168 h甲醇诱导,胞外分泌总蛋白量分别为324.02、350.87 mg/L和474.8 mg/L,发酵液酶活力分别为34 880、45 600 U/mL和50 180 U/mL.与KM71-HLY相比,KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1发酵产胞外总蛋白分别增加了8.3％和46.5％;KM71-HLY-pG418-PD1和KM71-HLY-pG418-Aft1所产胞外溶菌酶总酶活力较KM71-HLY分别增加了30.7％和43.9％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闫达中	武汉轻工大学生物与制药工程学院	12	5	1.0	2.0
2	刘军	武汉轻工大学生物与制药工程学院	13	24	3.0	4.0
3	王儒昕	武汉轻工大学生物与制药工程学院	3	0	0.0	0.0
4	李鑫	武汉轻工大学生物与制药工程学院	5	0	0.0	0.0
5	韩琴	武汉轻工大学生物与制药工程学院	2	0	0.0	0.0
6	陈园园	武汉轻工大学生物与制药工程学院	1	0	0.0	0.0
7	吴菁	武汉轻工大学生物与制药工程学院	3	0	0.0	0.0