miR-21通过靶向TIMP3调控黑色素瘤细胞的免疫抑制

• 作者: 丁玉芳 付楚涵 窦建华 郭爱元 陈敏 黄进华
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR-21 TIMP3 黑色素瘤细胞 免疫抑制因子
• 年，卷（期）: 2020,（16）
• 所属期刊栏目: 肿瘤免疫学
• 页码范围: 1973-1977,1982
• 页数: 6页
• 分类号: R737.31
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2020.16.011

摘要

目的:探讨微小RNA-21(miR-21)是否通过调节金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)的表达影响黑色素瘤细胞分泌免疫抑制因子.方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测黑色素瘤组织和细胞中miR-21的表达水平.脂质体介导的细胞转染法上调或下调黑色素瘤A375细胞中miR-21的表达.ELISA检测细胞培养上清液中IL-10、转化生长因子-β (TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF)的含量.双荧光素酶报告基因实验检测miR-21与TIMP3靶向关系.Western blot 检测细胞中TIMP3蛋白表达水平.结果:黑色素瘤组织和不同黑色素瘤细胞株中miR-21的表达量较癌旁组织和正常黑色素细胞明显降低(P＜0.05).在A375细胞中转染miR-21 mimic后,细胞中miR-21表达量显著上升,分泌的免疫抑制因子IL-10、TGF-β和VEGF的含量显著升高(P＜0.05).转染miR-21 inhibitor后,细胞中miR-21表达量显著降低,分泌的免疫抑制因子IL-10、TGF-β和VEGF的含量显著降低(P＜0.05).生物信息学软件预测miR-21和TIMP3存在靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证了miR-21和TIMP3靶向结合关系,miR-21能够负向调节TIMP3蛋白的表达.结论:miR-21能够靶向调控TIMP3的表达影响黑色素瘤细胞分泌的免疫抑制因子IL-10、TGF-β和VEGF的含量.