IL-17A对山羊乳腺上皮细胞分泌免疫防御因子功能的影响

• 作者: 高洋 同娟珍 谷奎 高飞 马文涛 陈德坤
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 白细胞介素-17A 真核表达 乳腺防御
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 2205-2213
• 页数: 9页
• 分类号: S852.42
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.11.21

摘要

白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)是Th17细胞的特征性细胞因子,被认为是一种关键的炎性细胞因子,在宿主抵抗胞外菌、真菌感染,以及炎症、超敏反应、自身免疫性疾病等多种疾病的病程中起到了重要的作用.为研究IL-17A对山羊乳腺上皮细胞免疫防御功能的影响,本研究根据GenBank公布的奶山羊IL-17A完全CDS区序列设计了真核表达引物,从Con A活化的奶山羊外周血单个核细胞(PBMCs)中提取总RNA,反转录PCR法扩增目的序列.扩增出的目的片段连接于真核表达载体pEGFP-Nl,并转入大肠杆菌Trans5α感受态细胞保存,将鉴定正确的重组质粒命名为IL-17A-pEGFP-Nl.将重组质粒转染入HEK293T细胞进行瞬时表达,收取真核表达上清作为刺激物.选取成年健康奶山羊,通过组织块贴壁法制备原代山羊乳腺上皮细胞(GMEC).用IL-17A真核表达上清(终质量浓度:15 mg/L)刺激山羊乳腺上皮细胞,通过Real-time PCR方法检测GMEC分泌的各种促炎性细胞因子、趋化因子以及防御性蛋白表达水平的变化.结果表明,IL-17A可以促进山羊乳腺上皮原代细胞分泌多种促炎性细胞因子、趋化因子和防御性蛋白,暗示IL-17A可能参与了奶山羊乳腺炎的发生,并在山羊乳腺免疫防御中起到了一定的调节作用.