水稻OsAAA1基因超表达载体构建及遗传转化

• 作者: 刘新琼 宋斯敏 李世娇 李琨 邓仕琪 郑启明
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻 OsAAA1基因 pU1301-Flag载体 遗传转化 分子鉴定
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 91-96
• 页数: 6页
• 分类号: S511
• 语种: 中文

摘要

为了构建带Flag标签的OsAAA1超表达载体,获得阳性转基因植株并分析其OsAAA1基因表达情况.以日本晴的cDNA为模板,将OsAAA1克隆至pU1301-Flag载体;重组质粒通过PCR、酶切及测序鉴定正确后,以农杆菌为介导进行遗传转化至日本晴;转基因植株通过分子鉴定正确后,采用Real-time PCR检测OsAAA1基因的mRNA表达水平变化.成功构建了OsAAA1-pU1301-Flag重组载体;遗传转化后获得33株转基因植株;通过分子鉴定筛选出26株阳性转基因植株;荧光定量PCR结果分析发现23株阳性转基因植株OsAAA1基因的表达出现不同程度上调.与日本晴相比,有8株表达量达到30倍以上,其中有5株表达量超过40倍.成功构建了带Flag标签的OsAAA1超表达载体;遗传转化结果表明OsAAA1-Flag能整合到日本晴的基因组DNA中,从而使OsAAA1基因的表达水平增加.本研究为后续通过Flag标签,在水稻植物体内直接挖掘与OsAAA1互作的功能蛋白奠定了基础.