双硫仑联合铜离子对人骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响

• 作者: 吕智 孙晓娟 张龙 徐朝健 程才统
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 双硫仑 铜 骨肉瘤 增殖 凋亡 JNK通路
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 干细胞相关基础实验
• 页码范围: 124-129
• 页数: 6页
• 分类号: R446|R496|R318
• 字数: 6305字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1853

摘要

背景:研究表明双硫仑本身具有抗肿瘤活性,可联合铜(Cu)离子在体内外水平对多种肿瘤发挥抑癌作用,但关于双硫仑对骨肉瘤细胞增殖和凋亡作用的影响尚未阐明.目的:探讨双硫仑-Cu在体内外水平对骨肉瘤增殖与凋亡能力的影响以及可能的作用机制.方法:实验方案经山西医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号为2017LL077).①体外实验:配置双硫仑在进入人体后的转换物二乙基二硫代氨基甲酸钠(diethyldithiocarbamate,DDTC)和Cu离子的复合物DDTC-Cu(0.5,1,2,3和5μmol/L),设置DDTC单药(5μmol/L)、Cu单药(5μmol/L)和空白对照组.药物处理人骨肉瘤细胞Saos-2细胞和MG-63细胞,CCK8法检测不同浓度DDTC-Cu对Saos-2细胞和MG-63细胞的增殖抑制作用;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测DDTC-Cu对Saos-2细胞凋亡水平变化;②体内实验:取4周龄BALB/c-nu/nu雌性裸鼠共10只,随机分为DDTC-Cu组和对照组.采用异位移植方法,在裸鼠右侧背部皮下注射Saos-2细胞和Matrigel混悬液(1:1混合),注射量400μL/只;接种2周后,对照组裸鼠腹腔注射地塞米松(0.5 mg/kg,隔日1次),DDTC-Cu组裸鼠腹腔注射地塞米松(0.5 mg/kg,隔日1次)和DDTC-Cu复合物(10 nmol/g,隔日1次);观察两组荷瘤小鼠移植瘤生长情况,绘制瘤体生长曲线.接种5周后麻醉下处死动物,完整取出瘤体,免疫组织化学检测瘤体石蜡切片组织中ki67蛋白的表达水平,Western blot检测瘤体组织中细胞增殖和凋亡蛋白的表达及JNK通路蛋白表达的变化.结果与结论:①体外实验结果:DDTC-Cu组对骨肉瘤细胞的增殖抑制作用明显高于其他3组;CCK-8实验结果显示DDTC-Cu对骨肉瘤细胞增殖抑制呈剂量依赖性,两株细胞的24 h药物半抑制浓度分别为0.337μmol/L和0.487μmol/L;流式细胞学检测结果显示DDTC-Cu可呈剂量依赖性促进Saos-2细胞的凋亡;②体内实验结果:DDTC-Cu组裸鼠移植瘤的体积和质量均小于对照组;免疫组织化学结果显示,DDTC-Cu组的瘤体中ki-67蛋白表达水平较对照组降低;Western blot检测结果显示,DDTC-Cu组瘤体蛋白中p-JNK和c-jun的表达水平均上调.结果提示,双硫仑联合Cu离子在体内外水平抑制人骨肉瘤细胞增殖并促进骨肉瘤细胞凋亡,其作用机制可能与JNK通路活化有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕智	山西医科大学第二医院骨科	90	257	8.0	10.0
2	徐朝健	山西医科大学第二医院骨科	8	11	2.0	3.0
3	张龙	山西医科大学第二医院骨科	7	7	2.0	2.0
4	程才统	山西医科大学第二医院骨科	4	0	0.0	0.0
5	孙晓娟	山西医科大学第二医院骨科	3	0	0.0	0.0