过表达P75神经生长因子受体负向调控骨髓间充质干细胞的成骨分化

• 作者: 朱伦井 段江涛 王宁 贝朝涌 陈俊毅 马跃刚 黄义杰
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: P75神经生长因子受体 骨髓间充质干细胞 成骨分化 慢病毒 碱性磷酸酶 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 骨髓干细胞
• 页码范围: 20-26
• 页数: 7页
• 分类号: R459.9|R394.2|R683
• 字数: 7926字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1856

摘要

背景:P75NTR广泛表达于神经组织及细胞中,并发挥着促进或抑制分化的双重作用;同时在骨折不愈合局部组织中也发现了P75NTR存在着过表达,因此研究P75NTR对骨髓间充质干细胞成骨分化的作用具有重要的意义,为临床上提高骨折不愈合修复的疗效提供重要靶点.目的:观察P75NTR过表达对大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导成骨分化的影响.方法:选取SD大鼠双侧股骨,用全骨髓分离贴壁法提取大鼠骨髓间充质干细胞并进行体外传代培养;构建表达EGFP的P75NTR过表达质粒GV358-P75NTR,并用空慢病毒载体包装收集P75NTR过表达慢病毒载体;选取体外培养至原代10 d的大鼠骨髓间充质干细胞,消化后种板,加入P75NTR过表达慢病毒及相关感染试剂进行感染实验,感染7 d后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测P75NTR蛋白的过表达情况;感染后用常规培养基培养7 d,更换成骨诱导分化培养基培养,诱导培养后第7,10,14天用酶标法定量检测碱性磷酸酶活力,诱导培养后第7,14天用茜素红染色观察矿化结节形成情况.结果与结论:①P75NTR过表达慢病毒感染骨髓间充质干细胞后能表达出绿色荧光蛋白(感染效率约90％),且P75NTR蛋白表达量明显增多,与阴性病毒对照组比较差异有显著性意义(P<0.05),过表达P75NTR细胞模型构建成功;②与阴性病毒对照组及未转染组相比,P75NTR过表达组细胞诱导分化后相应时间点的碱性磷酸酶活力明显降低,矿化结节形成减少,细胞聚集分布减弱,差异有显著性意义(P<0.05);③结果表明,P75NTR过表达负向调控了大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化.局部组织中P75NTR过表达抑制周围骨髓间充质干细胞成骨分化可能是骨缺损或骨折不愈合的重要因素.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱伦井	桂林医学院附属医院四肢创伤骨科	8	7	2.0	2.0
2	段江涛	桂林医学院附属医院四肢创伤骨科	8	7	2.0	2.0
3	马跃刚	桂林医学院附属医院四肢创伤骨科	4	10	2.0	3.0
4	王宁	桂林医学院附属医院四肢创伤骨科	7	5	1.0	2.0
5	陈俊毅	桂林医学院附属医院四肢创伤骨科	5	1	1.0	1.0
6	黄义杰	桂林医学院药学院药物化学教研室	2	1	1.0	1.0