下调miR-32-5p表达对顺铂耐药肺癌细胞化疗敏感性的影响及其机制

• 作者: 史明 李丁 陈兴
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 肺癌 微小RNA-32-5p 顺铂 化疗敏感性
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 43-48
• 页数: 6页
• 分类号: R734.2
• 字数: 6075字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2020.07.010

摘要

目的 探讨下调微小RNA-32-5p(miR-32-5p)表达对顺铂(DDP)耐药肺癌细胞化疗敏感性的影响及其机制.方法 体外培养人肺癌细胞系A549、SPC-A-1、H226(以下分别称A549、SPC-A-1、H226细胞)和人正常肺支气管上皮细胞系BEAS2B(以下称BEAS2B细胞),采用RT-qPCR法检测miR-32-5p表达,选择miR-32-5p相对表达量最高的肺癌细胞进行后续实验.采用药物持续接触、浓度递增诱导法筛选DDP耐药肺癌细胞.采用MTS法检测肺癌细胞及其DDP耐药细胞DDP半数抑制浓度(IC50),采用RT-qPCR法检测肺癌细胞及其DDP耐药细胞miR-32-5p表达.选择上述DDP耐药肺癌细胞,随机分为观察组和对照组,分别转染miR-32-5p inhibitor、NC inhibitor,采用RT-qPCR法验证转染效率,采用MTS法检测两组DDP IC50,采用流式细胞仪检测两组细胞凋亡率,采用Westernblotting法检测两组Bax、Bcl-2蛋白表达.通过TargetScan7.2软件预测miR-32-5p的靶基因.取DDP耐药肺癌细胞,随机分为miR-32-5p mimic-TCF21-wt组、miR-32-5p inhibitor-TCF21-wt组、miR-32-5p mimic-TCF21-mut组、miR-32-5p inhibitor-TCF21-mut组,相应转染miR-32-5p mimic或miR-32-5p inhibitor、pGLO-TCF21-wt或pGLO-TCF21-mut,采用双荧光素酶报告基因实验检测各组荧光素酶活性.结果 A549、SPC-A-1、H226细胞miR-32-5p相对表达量均高于BEAS2B细胞,且A549细胞miR-32-5p相对表达量高于SPC-A-1、H226细胞(P均＜0.05).故选择A549细胞进行后续实验.A549细胞与DDP耐药A549细胞的DDP IC50分别为(2.92 ±0.18)、(15.47±3.01) μg/mL,miR-32-5p相对表达量分别为1.00 ±0.03、12.35±2.87,二者比较P均＜0.05.观察组与对照组miR-32-5p相对表达量分别为0.27±0.08、1.00±0.05,DDP IC50分别为(7.43±1.25)、(16.22±2.54) μg/mL,细胞凋亡率分别为(7.69±0.24)％、(2.35±0.18)％,两组比较P均＜0.05.观察组Bax蛋白相对表达量高于对照组,Bcl-2蛋白相对表达量低于对照组(t分别为5.28、9.54,P均＜0.05).TargetScan7.2软件在线预测显示,TCF21启动子区与miR-32-5p具有结合位点.双荧光素酶报告基因实验显示,miR-32-5p mimic-TCF21-wt组荧光素酶活性低于miR-32-5p inhibitor-TCF21-wt组(P＜0.05),而miR-32-5p mimic-TCF21-mut组与miR-32-5p inhibitor-TCF21-mut组荧光素酶活性比较P＞0.05.结论 下调miR-32-5p表达能够提高DDP耐药肺癌细胞化疗敏感性,其机制与靶向调控TCF21能够促进Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达,从而提高细胞凋亡率有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	史明		1	0	0.0	0.0
2	陈兴		1	0	0.0	0.0
3	李丁		1	0	0.0	0.0