L-岩藻糖激酶/GDP-L-岩藻糖焦磷酸化酶的克隆表达及酶学性质研究

• 作者: 张涛 李梦丽 江波 魏万涛
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: L-岩藻糖激酶/GDP-L-岩藻糖焦磷酸化酶 GDP-L-岩藻糖 酶学性质 克隆与表达
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 18-24
• 页数: 7页
• 字数: 5420字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023455

摘要

核苷酸糖鸟嘌呤5’-二磷酸-p-L-岩藻糖(5'-diphospho-β-L-fucose,GDP-L-岩藻糖)是岩藻糖基化寡糖植物和细菌生物合成途径的关键中间体.从脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)的基因组DNA中克隆得到L-岩藻糖激酶/GDP-L-岩藻糖焦磷酸化酶(fucose pyrophosphorylase,FKP)基因,并与载体pET-22b(+)连接,在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达.利用载体上组氨酸标签对重组酶分离纯化,并进行酶学性质分析.结果 表明:FKP的最适温度和最适pH分别为45℃和7.5,该酶在pH 7.5 ～9.5之间很稳定,在4和12℃下孵育3h,酶的初始活性保持在90％以上.最适反应条件下,重组FKP对底物岩藻糖的Km和Kcat分别为0.44 mmol/L、(31.49 ±2.5) s-1.45℃下,在底物L-岩藻糖摩尔浓度为10 mmol/L条件下反应11h后,最终产生的GDP-L-岩藻糖为2.1 mmol/L.