过敏原Der p 23重组蛋白制备及其特异性IgE化学发光检测方法的建立

• 作者: 吴美丽 周鹰 崔玉宝 朱晗婷
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组过敏原 化学发光免疫分析法 屋尘螨 组分分辨诊断
• 年，卷（期）: 2020,（20）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 2491-2494
• 页数: 4页
• 分类号: R384.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2020.20.012

摘要

目的:制备过敏原Der p 23重组蛋白并建立其特异性IgE化学发光免疫检测方法.方法:以屋尘螨Total RNA为模板,依据GenBank公布的序列(No.EU414751)设计并合成引物,RT-PCR扩增Der p 23编码基因,构建原核表达质粒pET28a(+)-Der p 23,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,柱层析纯化收集目的蛋白并采用SDS-PAGE、Western blot鉴定.以此重组蛋白包被化学发光板,建立化学发光免疫分析法检测经ImmunoCAP检测的过敏性鼻炎或/和过敏性哮喘患者血清.结果:纯化后的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定可见单一条带,定量分析呈现0.5ml、0.25 mg/ml、纯度＞95％的重组蛋白纯化成功.以该重组蛋白建立化学发光方法检测屋尘螨过敏性哮喘或/和过敏性鼻炎患者血清,阳性率为89.8％,以国际金标准ImmunoCAP方法同步检测Der p 23单组分特异IgE阳性率为95.92％,两种方法检测结果差异无统计学意义(x2=0.237,P=0.626).结论:获得了屋尘螨过敏原重组蛋白Der p 23,成功建立了其化学发光免疫检测方法,为过敏原单组分分辨诊断方法建立提供了技术平台.