颠茄AbCYP80F1基因的克隆与功能分析

• 作者: 付维 姜育松 康健 张明生 强玮 苟光前 郑涛
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 颠茄 AbCYP80F1 东莨菪碱 启动子分析 RACE技术
• 年，卷（期）: 2020,（16）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 4291-4299
• 页数: 9页
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2020.16.025

摘要

目的 克隆颠茄AbCYP80F1基因和启动子序列,分析启动子上与调控信号和转录因子相关的调控元件,研究AbCYP80F1基因超表达对颠茄发根中东莨菪碱积累的影响.方法 以莨菪CYP 80F1为探针,在颠茄转录组中进行Blastn检索获得同源的unigene.采用RACE技术克隆AbCYP80F1全长,热不对称PCR技术克隆启动子序列,发根农杆菌浸染法获得超表达AbCYP80F1基因的颠茄发根,对培养的发根中东莨菪碱含量进行HPLC分析.结果 克隆得到1 675 bp的全长AbCYP80F1基因,其编码蛋白与铃铛子的CYP80F1亲缘关系最近.基因上游2 000 bp启动子上包含的顺式作用元件涉及光、无氧、生长素、茉莉酸、赤霉素和低温信号响应,同时包含有MYB、AP2/ERF、WRKY和bHLH转录因子的识别位点.超表达AbCYP80F1基因使颠茄发根中东莨菪碱含量平均提高了1.8倍.结论 AbCYP80F1是颠茄须根特异性表达的合成途径基因,超表达能提高终产物东莨菪碱含量,AbCYP80F1可能受到WRKY和bHLH转录因子的调控.