薏苡黑穗病快速检测方法研究

• 作者: 周明强 杨小雨 杨成龙 王健
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 薏苡黑穗病 抗体 酶联免疫反应
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 贮运加工·检测分析
• 页码范围: 197-200
• 页数: 4页
• 分类号: S435.19
• 字数: 4193字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2020.05.056

摘要

以薏苡黑穗病菌粉胞内蛋白为免疫原,制备抗体,建立薏苡黑穗病ELISA检测方法.结果表明,测定纯化后抗体的最高效价为1:800000,具特异性强;方阵试验测定抗原的最佳包被浓度为103 CFU/mL,抗体的工作浓度为1:4000;优化ELISA检测条件,确定抗体4℃过夜(8～12 h)包被效果最好,选择1％酪蛋白作为抗体的封闭液,抗体的最佳封闭时间为1.5 h,抗体的最佳孵育时间为2.5 h,最佳底物作用时间为15 min;建立ELISA标准工作曲线,表明抗体的灵敏度为104 CFU/mL.ELISA检测田间采集的黑穗病病叶显示,抗体可与病叶提取液发生特异性反应,而与健康叶提取液呈阴性反应,由此可确定黑穗病的存在与否.该方法可用于田间薏苡黑穗病快速检测,以及时指导病害防治.