家蝇乙酰胆碱酯酶基因密码子优化及酶学特性表征

• 作者: 卢海强 李晨 田洪涛 袁巧敏 谷新晰 黄蕾
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 乙酰胆碱酯酶 密码子优化 异源表达 有机磷农药 氨基甲酸酯类农药
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 72-80
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2020.12.010

摘要

基于密码子通用性及不同物种密码子使用频率差异原则,对家蝇乙酰胆碱酯酶的基因序列进行优化,旨在提高其在毕赤酵母中的表达量,增强其应用前景.将基因序列中的低频密码子更换为毕赤酵母偏好的密码子,同时调整乙酰胆碱酯酶各区段GC含量至45％～55％.将优化的家蝇乙酰胆碱酯酶连接至表达载体pPIC9K并转入毕赤酵母GS115中,摇瓶培养.以改进的Ellman法测定重组家蝇乙酰胆碱酯酶(mdAchE)酶学性质,通过有机磷及氨基甲酸酯类农药抑制试验分析重组酶mdAchE的生物活性.家蝇乙酰胆碱酯酶密码子优化后在毕赤酵母中实现高效表达,酶活力约8.82 U/mL.抑制试验显示,重组酶mdAchE能够被马拉硫磷等7种有机磷农药,克百威等8种氨基甲酸酯类农药抑制,最低抑制浓度IC15值为1.83×10-15μg/mL,远远低于其它诸如气相色谱法、生物传感器等方法测得的最低检测限(0.01μg/mL,4.14×10-6μg/mL).本试验结果表明,重组乙酰胆碱酯酶mdAchE在有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的检测领域具有较大的应用潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田洪涛		102	1161	19.0	29.0
2	谷新晰		42	131	8.0	9.0
3	卢海强		31	54	4.0	6.0
4	李晨		22	71	5.0	8.0
5	袁巧敏		2	0	0.0	0.0
6	黄蕾		5	0	0.0	0.0