单倍体酿酒酵母的丙酮酸脱羧酶基因(pdc1)的敲除与鉴定

• 作者: 康杰 王长丽 葛菁萍
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 酿酒酵母 2,3-丁二醇 Cre/loxP技术 丙酮酸脱羧酶 基因敲除
• 年，卷（期）: 2020,（24）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 91-98
• 页数: 8页
• 分类号: Q933
• 语种: 中文

摘要

为了抑制单倍体酿酒酵母H14的副产物乙醇的合成,使得2,3-丁二醇产量的提升.利用基因工程手段构建载体pW CL-pdc1,获得两端含40 bp pdc1的同源重组片段-loxP-kanMX-loxP.利用Cre/loxP技术获得pdc1缺失菌株S.cerevisiae H14-01(△pdc1).并以野生型菌株S.cerevisiae H14为对照,进行摇瓶发酵试验.S.cerevisiae H14-01长势明显略低于原始菌株.在整个发酵期间,2,3-丁二醇的最高产量和转化率分别为0.373±0.016 g/L和0.005 g/g,分别较原始菌株提高了37.30％和4.66％,但原始菌株没有检测到乙偶姻和2,3-BD生成.另外S.cerevisiae H14-01的乙醇转化率降低了33.24％,但甘油产量提高了15.76％.说明了碳流流向乙醇被阻断之后,会增加2,3-丁二醇的产量,同时会使此部分碳流流向甘油.因此,并为进一步获得高产2,3-丁二醇的工程微生物群体奠定了基础.