酿酒酵母环核苷酸磷酸二酯酶1的异源表达、 分离纯化与活性检测

• 作者: 张萌 李赤霞 王友升 田元元 陈滢 陈玉娟 韩潆仪
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 酿酒酵母 环核苷酸磷酸二酯酶 表达纯化 酶活性检测
• 年，卷（期）: 2020,（18）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 71-76
• 页数: 6页
• 分类号: TS201.2
• 字数: 4198字
• 语种: 中文

摘要

制备获得高纯度酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)环核苷酸磷酸二酯酶1(phosphodiesterase 1,PDE1)蛋白,以pGM-T-S.cerevisiae基因组为模板,聚合酶链式反应扩增目的基因,构建表达质粒,转化至大肠杆菌BL21中,并诱导表达.高压破碎菌体提取物先后通过亲和层析纯化系统(Ni-NAT柱)、离子交换纯化系统(Q-Sepharose柱)和分子筛纯化系统(Sephacryl S200柱)进行纯化,经酶活性测定显示,纯化后的蛋白活性达92％.研究结果可为将来该蛋白的晶体学分析和在酿酒酵母中的代谢调控提供前期基础.