Homer1基因真核表达重组质粒构建及HT22细胞转染鉴定

• 作者: 刘静 张晓敏 曹敏 王培昌
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 阿尔茨海默病 Homer1基因 真核表达重组质粒 瞬时转染
• 年，卷（期）: 2020,（22）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 44-47
• 页数: 4页
• 分类号: R741|Q785
• 字数: 4139字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2020.22.011

摘要

目的 构建Homer1基因真核表达重组质粒并在HT22细胞中转染和鉴定.方法 提取APP/PS1双转基因小鼠海马组织总RNA,经逆转录、PCR扩增,获取Homer1基因编码序列,1％琼脂糖凝胶电泳分离后,将Ho-mer1基因序列插入p3×FLAG-CMV-10载体的多克隆位点区域,获得p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,双酶切后鉴定重组质粒并进行基因测序.取HT22细胞,随机分为p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组,p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组分别转染p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒、p3×FLAG-CMV-10空载体,空白对照组不予转染.采用Western blotting法检测各组转染后Homer1蛋白表达.结果 成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,经双酶切鉴定和基因测序,该重组质粒序列与目的基因序列一致.p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组Homer1蛋白相对表达量明显高于p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组(P均<0.05),而p3×FLAG-CMV-10空载体组与空白对照组Homer1蛋白相对表达量比较P>0.05.结论 本研究成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Ho-mer1基因真核表达重组质粒,并成功转染HT22细胞,这为研究Homer1蛋白对脑内Aβ清除的影响及在阿尔茨海默病发病机制中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王培昌		161	782	15.0	19.0
2	刘静		153	580	12.0	16.0
3	曹敏		9	17	3.0	4.0
4	张晓敏		4	2	1.0	1.0