大肠杆菌DNA定性标准物质的制备及在枸杞子污染检测中的应用

• 作者: 夏丹丹 康文艺 王深垒 赵莹莹 郜晓峰 马常阳 马盼盼
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 枸杞子 大肠杆菌 质粒标准品 快速检测
• 年，卷（期）: 2020,（18）
• 所属期刊栏目: 安全检测
• 页码范围: 267-274
• 页数: 8页
• 分类号: TS207.4|Q819
• 字数: 5983字
• 语种: 中文

摘要

选取大肠杆菌毒力基因escV、stx2和hlyA为靶标序列构建质粒标准品,快速检测大肠杆菌.通过菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和测序对所构建的重组质粒进行验证,传15代测序验证质粒稳定性.制备escV、stx2、hlyA质粒标准品,对标准品进行检测限、均匀性、稳定性和定性实验.然后利用escV、stx2和hlyA质粒标准品对枸杞子中大肠杆菌进行检测.通过菌落PCR和测序结果表明escV、stx2和hlyA标准品制备成功.PCR体系对质粒标准品检测灵敏度达pg级别,并具有特异性,传15代测序的结果表明质粒标准品具有稳定性.escV、stx2和hlyA质粒标准品检测限分别为3.93×106、2.41×105拷贝/mL和2.14×105拷贝/mL,在25、4、-20℃条件下具有很好的稳定性和性质.escV、stx2和hlyA质粒标准品对34批枸杞子样品检测,escV、stx2没有被检测出,有3批枸杞子样品中检测出hlyA(检出率为8.82％).参考GB 4789.6—2016《食品微生物学检验?大肠菌群计数》方法结合16S rRNA测序对这3批枸杞子样品进行检测,结果没有检测出大肠杆菌,说明质粒标准品检测灵敏度高,相较于传统微生物分离鉴定,检出率有了很大的提高.