摘要:
背景:结合物理因素与支架材料建立共培养体系并采用细胞因子诱导,成为骨髓间充质干细胞成软骨分化的热点.目的:观察骨形态发生蛋白7复合国产多孔钽对骨髓间充质干细胞软骨向分化的影响.方法:分离培养SD大鼠(由北京华阜康生物提供)骨髓间充质干细胞,分组干预:①实验组加入多孔钽片,对照组不加多孔钽片,培养第5天,鬼笔环肽染色观察多孔钽片表面的细胞生长情况;培养1,3,5,7d,CCK-8法检测细胞增殖;②A组加入软骨细胞诱导液,B组加入软骨细胞诱导液与骨形态发生蛋白7,C组加入国产多孔钽材料与软骨细胞诱导液,D组加入国产多孔钽材料与软骨细胞诱导液和骨形态发生蛋白7,培养第7,14,21天,采用ELISA法检测细胞分泌Ⅱ型胶原、SRY型高迁移率族蛋白、基质金属蛋白酶13的水平,Western-blot法检测细胞中Ⅱ型胶原、SRY型高迁移率族蛋白、基质金属蛋白酶13的表达.动物实验获得华北理工大学动物实验伦理委员会批准.结果 与结论:①鬼笔环肽染色显示,骨髓间充质干细胞在多孔钽表面及周围生长及增殖良好;②实验组培养3,5d的增殖慢于对照组(P<0.05),培养1,7d的增殖与对照组无差异(P>0.05);③培养第7,14,21天时,A-D组Ⅱ型胶原、SRY型高迁移率族蛋白质量浓度逐渐升高(P<0.05).培养第7天时,A-D组基质金属蛋白酶13质量浓度逐渐减少(P<0.05);培养第14天时,A组高于其余3组(P<0.05),B、C、D组间比较差异无显著性意义(P> 0.05);培养第21天时,4组间比较差异无显著性意义(P>0.05);④Western-blot检测显示培养第7,14,21天时,A-D组Ⅱ型胶原、SRY型高迁移率族蛋白表达逐渐升高(P<0.05).培养第7天时,A-D组基质金属蛋白酶13蛋白表达逐渐减少(P< 0.05);培养第14天时,A组高于C、D组(P<0.05),B、C组高于D组(P< 0.05);培养第21天时,A组高于其余3组(P<0.05),其余组间比较差异无显著性意义(P> 0.05);⑤结果表明,骨形态发生蛋白7复合国产多孔钽可诱导骨髓间充质干细胞软骨向分化,可促进Ⅱ型胶原、SRY型高迁移率族蛋白的表达,抑制基质金属蛋白酶13的表达.