低氧环境下人乳腺癌细胞系MCF-7转录调节因子-1表达变化及其机制

• 作者: 乔如丽 刘颖 尚里 张锋军 焦扬驰 胡思畅 赵庆丽
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 低氧环境 乳腺癌 MCF-7细胞 E26转录特异性序列-1
• 年，卷（期）: 2020,（24）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 45-49
• 页数: 5页
• 分类号: R341
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2020.24.011

摘要

目的 观察人乳腺癌细胞系MCF-7 E26转录特异性序列-1(Ets-1)表达变化,并探讨其机制.方法 取对数生长期MCF-7细胞,使用氯化钴(CoCl2)诱导的化学性低氧培养环境以及缺氧小室培养环境模拟肿瘤细胞低氧微环境,通过过表达和敲降缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)研究Ets-1基因的表达情况,通过荧光定量PCR (q-PCR)和蛋白印记实验(Western blot)方法分别研究低氧环境下Ets-1 mRNA和蛋白表达情况,使用免疫共沉淀(Co-IP)和免疫荧光染色(IF)方法研究不同情况下蛋白互作,使用免疫沉淀法研究Ets-1蛋白翻译过程中的乙酰化、泛素化和磷酸化.结果 低氧刺激下,乳腺癌细胞系中Ets-1蛋白水平显著上升;低氧环境下Ets-1 mRNA相对表达量升高;过表达HIF-1α导致乙酰基转移酶p300活性增强;并且p300与Ets-1在细胞质中共定位;低氧刺激下,Ets-1的乙酰化水平升高,Ets-1乙酰化后与E3泛素连接酶COP-1相互作用减弱;p300抑制剂C646处理MCF-7细胞降低Ets-1蛋白水平,并增强其与COP-1相互作用.结论 低氧微环境下培养的MCF-7细胞中Ets-1蛋白和mRNA表达升高,Ets-1表达升高的调控机制可能为低氧促进了Ets-1转录,同时HIF-1α使乙酰基转移酶p300活性增强,引起Ets-1乙酰化水平升高,乙酰化Ets-1与E3泛素连接酶COP-1相互作用受阻,进而降低其降解.