分离白细胞法、低渗红细胞法、全血直提法提取的冻存血RNA质量及其反转录后基因扩增效果

• 作者: 刘欣 周晓涛 唐晓慧 彭贺含 杨四梅 赵商岐 郑佳
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: RNA提取方法 全血直提法 分离白细胞法 低渗红细胞法 血液标本 冻存血
• 年，卷（期）: 2020,（33）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 43-46
• 页数: 4页
• 分类号: R331
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2020.33.011

摘要

目的 观察分离白细胞法、低渗红细胞法、全血直提法提取的冻存血RNA质量及其反转录后基因扩增效果.方法 将冻存血标本12例份随机分为3组,分别采用分离白细胞法、低渗红细胞法、全血直提法提取RNA,提取出的RNA溶液分别记为A、B、C组.使用NANODROP 1000分光光度计测算各组RNA浓度及OD(A260/A280)值、OD(A260/A230)值,以OD(A260/A280)值、OD(A260/A230)值表示RNA纯度.采用琼脂糖凝胶电泳法观察各组RNA完整性.各组RNA反转录后,采用PCR法扩增,观察扩增产物电泳条带情况;各组RNA反转录后,采用qPCR法扩增,计算循环阈值(Ct值).结果 A组RNA浓度、OD(A260/A280)值、OD(A260/A230)值均高于B、C组(P均<0.05).A组琼脂糖凝胶电泳没有出现任何条带,B组条带严重弥散,C组有条带存在.C组RNA反转录后得到的扩增产物条带最为明亮.A、B、C组Ct值分别为28.27±1.01、27.49±0.22、24.20±0.25,其中C组Ct值与A、B组相比,P均<0.05.结论 与分离白细胞法、低渗红细胞法相比,全血直提法提取的冻存血RNA完整性更好,其反转录后基因扩增效果更高.