摘要:
目的 本实验通过给免疫性血小板减少症(ITP)模型小鼠经尾静脉注射经流式分选的Breg细胞,探究其对该疾病的治疗效果,以期为临床ITP的治疗提供新思路.方法 (1)制备小鼠Breg细胞:将25只Balb/c雄性小鼠经麻醉脱颈处死后取脾脏,研磨后收集脾细胞,首先经磁珠分选出B细胞,再加入流式抗体分选出Breg细胞(CD19+CD5+CD1dhi).(2)建立小鼠ITP模型:将12只小鼠随机分为两组,正常对照组和ITP模型组,模型组小鼠腹腔注射CD41抗体,注射剂量为每20克体重小鼠给予100μg药物,观察造模情况.(3)实验分组:将24只小鼠随机分为两组,即ITP模型组(I组)和ITP+Breg输注组(IB组),I组小鼠腹腔注射CD41抗体,IB组小鼠在腹腔注射CD41抗体后经尾静脉输注1×106个Breg细胞.每隔一定时间计数血小板,在I组与IB组血小板下降百分比有差距的时间点取小鼠脾脏进行Treg和Breg的流式检测.结果 经尾静脉取血检测两组小鼠的血常规,统计血小板计数显示,在第5、42、68小时I组与IB组小鼠血小板计数下降的百分比比较,差异有统计学意义(P<0.05),在此3个时间点每组各取4只小鼠进行麻醉后并处死,在操作台上取脾脏磨脾来收集细胞进行流式检测.经过流式分析发现,I组小鼠的Treg细胞的变化为升高趋势,而IB组小鼠表现为先下降后又升高的趋势,两组第42、68小时比较,差异有统计学意义(3.27±0.86 vs.1.90±0.08,P=0.022;3.23±0.24 vs.2.30±0.10,P=0.009).I组在这3个时间点的Breg细胞变化不大,IB组则表现为明显的先升高后下降,两组第42小时比较,差异有统计学意义(1.78±0.22 vs.4.33±1.30,P=0.010).结论 给ITP模型小鼠输注具有免疫负性调节作用的Breg细胞并未达到预期的治疗效果,这与临床ITP缓解患者外周血Breg细胞数量比初诊者升高不符,提示Breg细胞虽然是自身免疫性疾病的治疗方向,但在ITP疾病发生发展中的作用有待进一步探索.