别孕烯醇酮对6-羟基多巴胺损伤的细胞系SH-SY5Y的保护作用

• 作者: 王彤彤 叶鑫 边维 陈治池 杜娟娟 傅维达 陈梦娇 李俊楠 孙臣友
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 别孕烯醇酮 γ-氨基丁酸A受体 多巴胺能神经元 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 脑源性神经营养因子 免疫印迹法
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 神经生物学
• 页码范围: 5-13
• 页数: 9页
• 分类号: Q189
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.01.001

摘要

目的 明确别孕烯醇酮(APα)对6-羟多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞系的保护作用,并阐明可能的分子机制.方法 向体外培养的SH-SY5Y细胞系中分别加入6-OHDA、APα、γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)拮抗剂荷包牡丹碱(Bic)和电压门控L型Ca2+通道拮抗剂硝苯地平(nifedipine),采用免疫荧光细胞化学染色方法观察不同组别酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的变化,Western blotting检测胞质钙调蛋白(CaM)、钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ δ3(CaMKⅡδ3),胞核CaMKⅡδ3、脑源性神经营养因子(BDNF)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK1)表达的变化,采用蛋白质免疫共沉淀验证CaMKⅡ δ3与CDK1/BDNF的相互作用.结果 APo作用后,6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞TH和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数目均明显增加,而TH/BrdU双阳性细胞数目无显著变化;同时Western blotting结果表明,SH-SY5Y细胞胞质和胞核上述蛋白的表达与单纯6-OHDA组相比也明显上升,经Bic处理后各蛋白增加更为明显.免疫共沉淀结果表明,CaMKⅡδ3与CDK1/BDNF存在相互作用.结论 APα对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的保护中,GABAAR发挥负性调控作用,通过稳定细胞的内环境达到增加TH阳性神经元数量的目的,其中Ca2+-CaM-CaMKⅡδ3信号通路和BDNF与CDK1发挥了关键作用.