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泛素结合酶E2C通过特异性结合β-微管蛋白参与调控肝细胞癌进展
泛素结合酶E2C通过特异性结合β-微管蛋白参与调控肝细胞癌进展
作者:
刘梦
朱怡卿
黄金凤
肖邦
陈美婷
王芳
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
肝细胞癌
泛素结合酶E2C
β-微管蛋白
Wnt信号通路
摘要:
目的 筛选泛素结合酶E2C(UBE2C)的底物蛋白,并探讨其在肝细胞癌进展中的作用.方法 构建带有Halotag标签的UBE2C过表达质粒,将UBE2C与Halotag在人高转移肝癌细胞系HCCLM3中融合表达,通过Halolink树脂沉淀UBE2C结合的底物蛋白,并联合SDS-PAGE和质谱对底物蛋白进行鉴定.在人肝癌细胞系Huh-7中过表达UBE2C,通过qRT-PCR、蛋白质印迹分析和细胞免疫荧光实验检测UBE2C过表达对其底物蛋白表达的影响,利用细胞核质分离结合蛋白质印迹分析及TOP flash/FOP flash荧光素酶报告基因实验检测UBE2C过表达对Wnt信号通路的影响,并进一步通过qRT-PCR和蛋白质印迹分析验证UBE2C过表达对Wnt信号通路下游基因表达的影响.结果 Halotag共沉淀产物经SDS-PAGE和银染后所获得差异条带的质谱鉴定结果显示,β-微管蛋白是UBE2C结合的底物蛋白.与对照组相比,过表达UBE2C降低了Huh-7细胞中β-微管蛋白在蛋白水平的表达(P<0.01),但对其在mRNA水平的表达没有影响(P>0.05).同时,过表达UBE2C促进了β-联蛋白入核(P<0.05),提高了TOP flash/FOP flash荧光素酶活性(P<0.01),增强了Wnt信号通路下游基因JNK、细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶7的表达(P均<0.05).结论 UBE2C通过特异性结合β-微管蛋白降低肝癌细胞中β-微管蛋白水平,从而提高Wnt信号通路活性,促进其下游基因表达,进而参与调控肝细胞癌的进展.
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文献信息
篇名
泛素结合酶E2C通过特异性结合β-微管蛋白参与调控肝细胞癌进展
来源期刊
第二军医大学学报
学科
医学
关键词
肝细胞癌
泛素结合酶E2C
β-微管蛋白
Wnt信号通路
年,卷(期)
2021,(1)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
14-20
页数
7页
分类号
R735.7
字数
语种
中文
DOI
10.16781/j.0258-879x.2021.01.0014
五维指标
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研究主题发展历程
节点文献
肝细胞癌
泛素结合酶E2C
β-微管蛋白
Wnt信号通路
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
第二军医大学学报
主办单位:
第二军医大学
出版周期:
月刊
ISSN:
0258-879X
CN:
31-1001/R
开本:
大16开
出版地:
上海市翔殷路800号
邮发代号:
4-373
创刊时间:
1980
语种:
chi
出版文献量(篇)
9782
总下载数(次)
21
总被引数(次)
64408
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