黄连素剂量依赖性抑制脂多糖刺激下大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞促凝和纤溶抑制因子的表达

• 作者: 李想 杨贵霞 沈锋 郑兴昊 何天慧 李书文 程玉梅 李清 李伟 秦进成
• 来源期刊: 中华危重病急救医学
• 关键词: 黄连素 大鼠 肺泡上皮细胞，Ⅱ型 RLE-6TN细胞 急性呼吸窘迫综合征 凝血/纤溶
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 论著·重症呼吸（基础研究）
• 页码范围: 53-58
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn121430-20200917-00636

摘要

目的:探讨黄连素对脂多糖（LPS）刺激下大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）表达及分泌促凝和纤溶抑制相关因子的影响。方法:体外培养大鼠AECⅡ细胞株RLE-6TN，取对数生长期细胞，用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测黄连素对细胞的毒性作用，根据半数抑制浓度（IC 50）确定药物浓度范围。将对数生长期细胞分为5组：空白对照组使用DMEM培养基常规培养；LPS组在培养基中加入5 mg/L的LPS刺激细胞；黄连素预处理组先分别加入20、50、80 μmol/L黄连素预处理1 h后，再加入5 mg/L的LPS共培养。LPS刺激24 h后收集细胞，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）及实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测细胞组织因子（TF）、组织因子途径抑制物（TFPI）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的蛋白和mRNA表达；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中活化蛋白C（APC）、Ⅲ型前胶原肽（PⅢP）、凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）及抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）的含量。 结果:根据抑制率曲线计算得出黄连素对RLE-6TN细胞的IC 50为81.16 μmol/L，故选择20、50、80 μmol/L作为黄连素的干预浓度。与空白对照组相比，LPS刺激24 h后RLE-6TN细胞表达及分泌促凝和纤溶抑制相关因子异常，表现为TF、PAI-1的蛋白及mRNA表达水平均明显升高，TFPI的蛋白及mRNA表达水平明显降低；同时细胞上清液中APC、ATⅢ含量均明显降低，而PⅢP、TAT含量均明显升高。给予黄连素预处理后，LPS刺激诱导的RLE-6TN细胞表达及分泌促凝和纤溶抑制相关因子异常情况得到纠正，并呈现一定的剂量依赖性，以80 μmol/L时作用更为显著；与LPS组相比，黄连素80 μmol/L预处理组细胞中TF、PAI-1的蛋白及mRNA表达水平均明显降低〔TF蛋白（TF/GAPDH）：0.45±0.02比0.55±0.03，TF mRNA（2 -ΔΔCt）：0.39±0.08比1.48±0.11，PAI-1蛋白（PAI-1/GAPDH）：0.37±0.02比0.64±0.04，PAI-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.14±0.29比4.18±0.44，均 P<0.01〕，TFPI蛋白及mRNA表达水平明显升高〔TFPI蛋白（TFPI/GAPDH）：0.53±0.02比0.45±0.02，TFPI mRNA（2 -ΔΔCt）：0.94±0.08比0.40±0.05，均 P<0.01〕；同时细胞上清液中APC、ATⅢ含量明显升高〔APC（μg/L）：1 358.5±26.0比994.2±23.1，ATⅢ（μg/L）：118.0±7.4比84.4±2.7，均 P<0.01〕，而PⅢP和TAT含量则均明显降低〔PⅢP（μg/L）：11.2±0.4比18.6±0.9，TAT（ng/L）：222.1±2.8比287.6±7.0，均 P<0.01〕。 结论:黄连素可以剂量依赖性抑制LPS刺激下大鼠AECⅡ细胞促凝及纤溶抑制相关因子表达和分泌，促进抗凝因子表达和分泌，有望成为有效防治急性呼吸窘迫综合征（ARDS）肺泡过度促凝和纤溶抑制的新靶点。