中华绒螯蟹Na+-K+-Cl-协同转运蛋白基因的克隆和功能分析

• 作者: 杨志刚 周俊宇 朱靓亮 成永旭 夏冬梅
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 关键词: 中华绒螯蟹 Na+-K+-Cl-协同转运蛋白(NKCC) 基因克隆 渗透压调节
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 动物学研究专题Ⅰ|Monographs on zoology research Ⅰ
• 页码范围: 84-92
• 页数: 9页
• 分类号: R392
• 语种: 中文

摘要

为研究Na+-K+-Cl-协同转运蛋白(NKCC)基因在中华绒整蟹(Eriocheirsinensis)应对高盐胁迫过程中的作用,采用RACE技术首次克隆到中华绒螯蟹NKCC基因全长序列,运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对中华绒整蟹NKCC基因进行组织定量,并进行生物学信息分析.结果表明:该基因的cDNA全长为4 127 bp,其中5'非编码区(UTR)长度为18 bp,3'非编码区(UTR)长度为944 bp,开放阅读框(ORF)长度为3 165 bp,编码1 054个氨基酸.理化分析预测其分子量为51.066 kDa,理论等电点为4.65.预测中华绒螯蟹NKCC二级结构由12个跨膜结构域组成.同源对比结果显示:中华绒螯蟹NKCC的氨基酸序列与拟穴青蟹(Scylla paramamosain)NKCC相似度最高,为86.17％.系统进化分析表明中华绒螯蟹NKCC与拟穴青蟹、三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)、可口美青蟹(Callinectes sapidus)、蓝蟹(Callinectes sapidus)聚为一支.不同组织的荧光定量结果显示:NKCC基因在中华绒螯蟹的肠、脑神经节、胸神经节、鳃、胃、肝胰腺、肌肉、眼、心脏和血清中均有表达且在中华绒螯蟹肠的表达量最高.在盐度为25％‰的急性胁迫下,NKCC基因在中华绒螯蟹肠中的表达量随着胁迫时间延长变化显著(P＜0.05),并在胁迫72 h后恢复稳定.以上结果显示,NKCC基因参与了中华绒螯蟹渗透压调节,并在其渗透压平衡中发挥重要作用.