一种PIC荧光免疫层析检测方法的建立

• 作者: 陈慧 邓春泉 何燕燕 吴配配 褚光亮 项伟玲 金丽琴
• 来源期刊: 生物技术
• 关键词: 纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物(PIC) 单克隆抗体 荧光免疫层析技术 相关性
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法|Technique and Method
• 页码范围: 38-45
• 页数: 8页
• 分类号: Q599
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.01.0006

摘要

[目的]建立一种PIC荧光免疫层析检测方法.[方法]以天然PIC为免疫原,使用快速免疫方案免疫BALB/C小鼠,利用常规单抗制备技术制备抗PIC单抗;以PIC、α2-AP、PLG为筛选源使用间接ELISA进行单克隆抗体筛选;通过Western Blot及间接ELISA对抗体的抗原识别表位及特异性进行鉴定;通过间接ELISA对抗体类型及亲和常数进行检测;通过双抗夹心法筛选出抗PIC抗体的最优配对,建立PIC的荧光免疫层析检测方法;对建立的方法进行灵敏度和精密度测试;使用65例临床样本初步评价与Sysmex试剂的相关性.[结果]获得了一对针对PIC新抗原的最优配对单抗B6A02和B6A23,抗体属于IgG并对PIC有较高亲和力(亲和常数达到10-9),并使用B6A02和B6A23分别作为包被抗体和检测抗体制备PIC检测试剂,该试剂在40～40 000 ng/mL范围内呈良好的线性关系(R2 = 0.997);灵敏度为40 ng/mL;批间CV不高于5.47％;与Sysmex的PIC检测试剂相关性良好(R2 =987).[结论]使用针对PIC新抗原表位建立了 PIC荧光免疫层析检测试剂,具有灵敏度高、精密度好、特异性强等特点,与Sysmex试剂检测结果符合率高.