中华绒螯蟹水通道蛋白1基因的克隆、表达及RNA干扰研究

• 作者: 杨志刚 张龙 陈春宇 成永旭 夏冬梅
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 关键词: 中华绒整蟹 水通道蛋白 基因克隆 RNA干扰 盐度胁迫
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 动物学研究专题Ⅰ|Monographs on zoology research Ⅰ
• 页码范围: 93-101
• 页数: 9页
• 分类号: R392
• 语种: 中文

摘要

采用cDNA末端快速扩增(Rapid-Amplification of cDNA Ends,RACE)技术从中华绒螯蟹的后鳃中克隆获得水通道蛋白1(AQP1)的全长序列,利用实时荧光定量(qRT-PCR)构建中华绒整蟹AQP1基因组织表达谱,并进行生物信息学分析.EsAQP1的cDNA全长序列为1 646 bp,开放阅读框(ORF)为1 119 bp,编码373个氨基酸.理化分析预测其分子量为39.367 kDa,等电点为5.1.序列比对结果显示EsAQP1的氨基酸序列分别与三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)、可口美青蟹(Callinectes sapidus)、罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)和斑节对虾(Penaeusmonodon)具有74％、71％、64％和63％的同源性.不同组织荧光定量结果显示,EsAQP1基因在中华绒螯蟹肠和鳃组织中表达丰度较高,在肝胰腺和血细胞中表达丰度较低.分析发现盐度胁迫会显著影响中华绒螯蟹肠道和鳃组织中EsAQP1基因的表达,进一步通过RNA干扰EsAQP1基因表达之后,对干扰后Na+-K+-Cl-协同转运蛋白(NKCC)基因NKCC和Na+/K+-ATPase基因Na+/K+-ATP的表达进行分析,发现NKCC和Na+/K+-ATP表达显著上调.以上研究结果表明,EsAQPl基因可能在中华绒螯蟹的渗透压调节系统中发挥重要作用.