细粒棘球绦虫水通道蛋白9的多肽特征及免疫定位研究

• 作者: 谭青青 李锴 张静 高剑 吴宏烨 范俊杰 陆合 叶彬
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细粒棘球绦虫 水通道蛋白 多肽抗体 亚细胞定位 组织定位
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 45-52,59
• 页数: 9页
• 分类号: R383.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2020.00.178

摘要

目的 研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9(EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况.方法 根据EgAQP9 特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH 作为免疫原注射免疫新西兰兔以制备多克隆抗体.酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测多肽抗体滴度,蛋白免疫印迹法(West-ern blot)测定多肽抗体免疫活性,免疫荧光实验分析EgAQP9 的亚细胞定位,免疫组化实验分析EgAQP9 组织定位.结果 免疫新西兰兔成功制备出多肽抗体;间接ELISA检测其多肽抗体效价高达1:256 000;Western blot 结果显示多肽抗体能够特异识别细粒棘球绦虫中36 kDa处的条带,与EgAQP9 预测的相对分子量大小相符;免疫荧光实验结果显示EgAQP9 分布于棘球蚴生发细胞的胞质、胞膜中;免疫组化实验显示该蛋白主要分布在原头蚴表面及棘球蚴囊泡生发层.结论 本研究以制备的EgAQP9 兔源多克隆抗体定位了 AQP9 在棘球蚴生发细胞、原头蚴及棘球蚴囊壁中的分布状况.