白菜型冬油菜类甜蛋白的筛选、克隆及其在低温胁迫下的表达

• 作者: 马骊 袁金海 孙万仓 刘自刚 曾秀存 武军艳 方彦 李学才 陈奇 许耀照 蒲媛媛 刘海卿 杨刚 刘林波
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 白菜型冬油菜 双向电泳 低温 类甜蛋白
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 耕作栽培·生理生化
• 页码范围: 620-628
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2017.00620

摘要

类甜蛋白是一种能在低温胁迫下诱导表达，增强植物抗逆性的关键蛋白质。本研究运用双向电泳结合质谱技术，筛选低温胁迫下陇油7号叶片差异蛋白点，从中分离出与抗寒密切相关的类甜蛋白。根据已发表植物类甜蛋白基因TLP的保守序列设计引物，采用RT-PCR扩增陇油7号的DNA，获得TLP基因开放阅读框，长度为732bp，编码243个氨基酸的蛋白质。生物信息学分析显示，与甘蓝型油菜(Brassica napus)的蛋白质氨基酸序列同源性高达99.18%，该基因在进化上高度保守，其保守序列属于植物的GH69-TLP-SF超家族，TLP相对分子质量和理论等电点分别为26.02kD和9.15。TLP含有一个信号肽，为亲水性蛋白，亚细胞定位预测其是在内质网中合成的蛋白。二级结构预测表明陇油7号的TLP是由不规则卷曲和延伸链组成的不稳定蛋白。实时荧光定量和半定量分析显示，在适当阈值的低温胁迫下TLP基因表达量上调，表明该基因在白菜型冬油菜陇油7号适应低温胁迫过程中发挥重要作用。