类弹性蛋白多肽-红色荧光蛋白融合蛋白的表达纯化及细胞相容性

• 作者: 刘宁 崔梅英 王明月 杨泽斌 王浩 毛禹 方楷漪 夏薇 关新刚
• 来源期刊: 北华大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 类弹性蛋白多肽 红色荧光蛋白 原核表达 蛋白纯化 细胞相容性
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 生物科学·基础医学
• 页码范围: 42-46
• 页数: 5页
• 分类号: Q943.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.11713/j.issn.1009-4822.2021.01.008

摘要

目的 构建携带红色荧光蛋白(mCherry)标签的类弹性蛋白(ELP)原核表达载体,并表达纯化ELP-mCherry融合蛋白,探讨ELP-mCherry融合蛋白与细胞的相容性.方法 对利用限制性内切酶Xba I和Xho I对mCherry质粒和pET28a-ELP载体同时进行双酶切,将酶切产物回收、连接并转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,构建重组质粒pET28a-ELP-mCherry;将重组质粒转化到BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞中,诱导表达ELP-mCherry融合蛋白;利用可逆转变循环(ITC)法对ELP-mCherry融合蛋白进行纯化;通过MTT法探讨ELP-mCherry融合蛋白与人胚肾上皮细胞HEK293T和小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3的细胞相容性.结果 DNA测序结果 显示成功构建了ELP-mCherry原核表达载体;利用BL21(DE3)大肠杆菌表达系统成功表达ELP-mCherry融合蛋白,通过ITC法纯化得到了高纯度融合蛋白.MTT结果 表明:在所有ELP-mCherry蛋白测试浓度下,HEK293T和NIH3T3细胞存活率接近或超过100％.结论 成功构建ELP-mCherry原核表达载体,成功表达并纯化得到高纯度的ELP-mCherry融合蛋白,ELP-mCherry融合蛋白在HEK293T和NIH3T3细胞中具有良好的细胞相容性.