牙龈卟啉单胞菌影响牙龈上皮细胞miR-155-5p通过JAK/STAR信号通路作用牙周炎的机制

• 作者: 李莹 张波 赵紫婷
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 牙周炎 牙龈卟啉单胞菌 微小RNA JAK/STAT信号通路
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 口腔微生态学
• 页码范围: 51-57
• 页数: 7页
• 分类号: R781.4+2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13381/j.cnki.cjm.202101009

摘要

目的 通过生物信息学对GEO数据库进行分析筛选miRNA后运用分子生物学手段验证并对机制进行深入探讨,为未来牙周炎治疗的生物标志物筛选及靶向治疗提供理论依据.方法 通过生物信息学分析GEO数据库发现牙周炎患者中差异表达的miRNA.在DIANA生信预测网站中发现了与JAK/STAT信号传导方式有关的miRNA.随后,TargetScan被用于预测miRNA的靶mRNA,该mRNA不仅在牙周炎中差异表达,而且与JAK/STAT信号传导有关.利用基因集富集分析(GSEA)寻找与JAK/STAT信号转导途径紧密相关的基因集.通过实时定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测在牙周炎中差异表达并与JAK/STAT信号有关的miRNA和mRNA的表达.通过免疫组织化学(IHC)观察组织中IL6ST的表达.通过双重荧光素酶测定法证实了miRNA和mRNA之间的关系.此外,采用细胞内氧化活性氧红色荧光检测试剂盒检测活性氧(ROS)的变化.结果 在牙周炎患者中,与正常组织比较,MiR-155-5p被下调,mRNA IL6ST被上调且差异均具有统计学意义(t = 9.188 7、2.852 1,P=0.000 6、0.015 7).与对照组比较,miR-155-5p在P.gingivalis处理组表达情况出现明显下降且IL6ST在处理后表达量出现明显升高,差异均有统计学意义(t=2.125 3、1.852 0,P=0.013 5、0.015 7).miR-155-5p具有IL6ST 3'非翻译区的靶结合位点.通过过表达miR-155-5p能够明显抑制JAK/STAT信号通路p-STAT3、p-JAK2,IL6ST 蛋白的表达(t= 1.924 8、2.530 8、3.107 5,P=0.023 1、0.0116、0.010 0).感染牙龈卟啉单胞菌后,细胞中的ROS产生增加(t=3.0512、9.632 7,均P＜0.01).结论 牙龈卟啉单胞菌可抑制miR-155-5p表达,激活GECs中的JAK/STAR信号,促进牙周炎的发生和发展.