规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9靶向Rho GDIα基因敲除质粒的构建及其对小鼠肝癌细胞系Hepa 1-6迁移的影响

• 作者: 曲明娟 李延敏 谢静 秦苗苗 王静 周菊华
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9 鸟苷酸解离抑制因子α 向导RNA PX458质粒 肝癌细胞系Hepa 1-6 反转录聚合酶链反应 小鼠
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 肿瘤生物学
• 页码范围: 55-59
• 页数: 5页
• 分类号: R73-37
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.01.008

摘要

目的 利用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建Rho鸟苷酸解离抑制因子α(GDIα)的基因敲除载体,并探讨干扰Rho GDIα后对小鼠肝癌细胞Hepa 1-6迁移的影响.方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计Rho GDIα的向导RNA(sgRNA)序列,并与PX458载体相连,构建Rho GDIα基因敲除重组质粒PX458-Rho GDIα-sgRNAl和PX458-Rho GDIα-sgRNA2;脂质体转染法将重组质粒转染人Hepa 1-6细胞抑制Rho GDIα的基因表达;RT-PCR法检测Rho GDIα被抑制后的mRNA表达情况;划痕法检测Rho GDIα干扰后Hepa 1-6细胞迁移距离的差异;迁移小室法检测抑制Rho GDIα后Hepa 1-6细胞迁移数量的差异.结果 成功构建了Rho GDIot的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-Rho GDIα-sgRNAs;转染有PX458-Rho GDIα-sgRNA1 的Hepa 1-6细胞与对照组只转染空载体PX458的细胞相比,Rho GDIα的表达被明显抑制(P＜0.05),而且该组细胞从划痕起始处迁移到空白处距离较远,从迁移小室上端迁移到底端数目明显增多,差异极其显著(P＜0.01),说明Rho GDIα被抑制后肝癌细胞的迁移能力提高.结论 CRISPR/Cas9法构建的重组质粒PX458-Rho GDIα-sgRNA1可以有效抑制Rho GDIα的基因表达;Rho GDIα被抑制后明显促进小鼠肝癌细胞Hepa 1-6的迁移,提示在体情况下,Rho GDIα的表达可能起到抑制细胞迁移的重要作用,在肿瘤组织中,可以利用过表达Rho GDIα来抑制肿瘤细胞的转移.