长链非编码RNA TP73-AS1调控miR-181b及其靶基因HMGB1的表达以及对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

• 作者: 李超 何淼 杨桄权 何小艳 陈兆红
• 来源期刊: 肿瘤
• 关键词: 癌,非小细胞肺 RNA,未翻译 HMGB1蛋白质 细胞增殖 细胞运动 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究|Basic Research
• 页码范围: 225-237
• 页数: 13页
• 分类号: R734.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2021.11.234

摘要

目的:探讨长链非编码RNATP73-AS1通过调控微RNA(microRNA,miRNA,miR)-181b及其靶基因高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1,HMGB1)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响.方法:采用实时荧光定量PCR法检测42例癌组织及其对应的癌旁组织,以及人正常肺上皮细胞BEAS-2B和人NSCLC细胞(A549和NCI-H1299)中TP73-AS1的表达水平,并分析TP73-AS1表达与患者总生存期的相关性.采用脂质体法将 shRNA-TP73-AS1(shTP73-AS1)和 shRNA-NC(shNC)转入A549和NCI-H1299细胞,分别采用CCK-8法、Transwell小室实验、划痕愈合实验及FCM法检测敲减TP73-AS1表达对NSCLC细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响.采用双荧光素酶报告基因验证TP73-AS1、miR-181b和HMGB1间的靶向关系.A549和NCI-H1299细胞中分别转入shTP73-AS1、shTP73-AS1+miR-181b-抑制子(inhibitor)和 shTP73-AS1+pcDNA-HMGB1,再用CCK-8法、Transwell小室实验、划痕愈合实验及FCM法检测敲低TP73-AS表达后再沉默miR-181b表达或使HMGB1过表达对A549和NCI-H1299细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响.结果:TP73-AS1mRNA在癌组织中的相对表达量明显高于癌旁组织(P＜0.05),癌组织中TP73-AS1的表达水平与miR-181b的表达水平呈负相关(r=-0.623,P＜0.05).A549和NCI-H1299细胞中TP73-AS1的表达水平均明显高于BEAS-2B细胞(P值均＜0.05).敲低TP73-AS1表达可以明显抑制A549和NCI-H1299细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并促进细胞凋亡(P 值均＜0.05).双荧光素酶报告基因检测证实,TP73-AS1靶向作用于miR-181b并下调其表达,miR-181b可负调控HMGB1的表达.敲低TP73-AS1表达可以明显抑制A549和NCI-H1299细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平(P 值均＜0.05).同时,转染 shTP73-AS1+miR-181b-inhibitor 或者shTP73-AS1+HMGB1过表达载体后,HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平较仅转染shTP73-AS1明显上调(P值均＜0.05),细胞增殖、侵袭和迁移能力也明显升高,而凋亡水平明显下降(P值均＜0.05).结论:TP73-AS1在NSCLC组织和细胞中高表达,可通过调控miR-181b/HMGB1轴促进癌细胞增殖、侵袭、迁移,并促进凋亡.