巨细胞病毒感染C57BL/6小鼠诱导NK细胞免疫应答的模型研究

• 作者: 吴舒婷 彭虹艳 方芳 王莉莉 李梨平
• 来源期刊: 国际免疫学杂志
• 关键词: 自然杀伤细胞 鼠巨细胞病毒 C57BL/6小鼠
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-14
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2021.01.002

摘要

目的:研究小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus，MCMV)感染C57BL/6小鼠诱导自然杀伤(natural killer，NK)细胞免疫应答的最佳剂量和最佳时间。方法:分别根据剂量和时间效应进行分组，剂量效应：无特定病原体( specific pathogen free，SPF)级8周龄C57BL/6雌鼠15只，根据MCMV滴度分为四组，未感染的0个蚀斑形成单位(plaque forming unit，PFU)组(3只)、2.5×10 4PFU组(4只)、5.0×10 4PFU组(4只)和10.0×10 4PFU组(4只)，随后常规饲养7天；时间效应：将8周龄C57BL/6雌鼠14只随机分为四组，分别为0天组(4只)、3天组(4只)、7天组(4只)、14天组(2只)，建模0天腹腔注射5.0×10 4PFU的MCMV感染各组小鼠。在感染后对应天数处死各组小鼠，取小鼠脾脏制成单细胞悬液，并用流式细胞术分析各种组NK细胞比例、Ly49H及颗粒酶B(granzyme B，GZMB)、NK细胞溶酶体相关膜蛋白-1(CD107a)和γ-干扰素(interferon-γ，IFN-γ)的表达。 结果:MCMV感染7天后，与0 PFU组相比，2.5×10 4PFU组、5.0×10 4PFU组和10.0×10 4PFU组脾脏NK细胞占淋巴细胞的比例明显下降{(1.90±0.32)%比[(0.91±0.14)%，(0.62±0.16)%，(0.85±0.26)%]， F＝21.271， P<0.05}，CD27 ＋CD11b ＋NK细胞比例显著下降{(22.40±4.55)%比[(13.20±1.29)%，(10.78±1.21)%，(11.38±1.76)%]， F＝17.272， P<0.05}，CD11b ＋NK细胞比例显著增加{(59.87±5.33)%比[(71.08±1.82)%，(74.25±1.95)%，(70.90±2.49)%]， F＝14.641， P<0.05)}，CD43 ＋KLRG1 ＋NK细胞占NK细胞的比例增加{(39.40±5.73)%比[(77.00±0.67)%，( 81.23±2.21)%，( 76.63±7.36)%]， F＝55.282， P<0.05)}，Ly49H ＋NK细胞亚群数量显著增加{(42.07±1.21)%比[(63.50±1.30)%，(63.58±3.71)%，(61.68±4.84)%]， F＝32.273， P<0.05)}，组间差异具有统计学意义。在NK细胞功能方面，MCMV感染7天后，与0 PFU组相比，2.5×10 4PFU组、5.0×10 4PFU组和10.0×10 4PFU GZMB的表达显著增加{(287.00±30.79)%比[(384.25±63.91)%，(529.75±66.08)%，(466.50±83.38)%]， F＝8.730， P<0.05}，IFN-γ分泌减少{(36.00±5.33)%比[(4.88±3.35)%，(3.03±1.56)%，(3.61±2.18)%]， F＝87.663， P<0.05}。时间效应的比较结果显示，MCMV感染3天后，NK细胞CD107a和颗粒酶B表达与0天相比显著升高[(22.98±4.58)%比(6.32±0.75)%，(5969.25±1159.86)%比(788.50±88.17)%， F值分别为41.072和67.448， P值均<0.05]，差异具有统计学意义。 结论:本研究表明，MCMV感染C57BL/6小鼠模型可选择的最佳感染剂量为5×10 4PFU，最佳建模时间为感染后3天。