耐热植酸酶突变体的筛选及性质研究

• 作者: 陈中伟 郑璞 陈鹏程 吴丹
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 关键词: 植酸酶 易错PCR 热稳定性 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 30-37
• 页数: 8页
• 分类号: Q814
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.2010033

摘要

目的:对大肠杆菌Escherichia coli植酸酶基因进行定向进化,获得热稳定性提高的植酸酶突变体.方法:利用易错PCR技术和96微孔板高通量筛选方法获得突变体基因,并对突变酶进行异源表达、纯化及性质研究.结果:通过筛选获得3株热稳定性明显提高的植酸酶突变体APPA1、APPA2、APPA3.酶学性质分析结果表明,3个突变体分子量均约为55kDa,最适pH均为4.5,与野生型无明显差别,热稳定性较野生型均有显著提高,其中突变体APPA3的最适温度为65C,较野生酶提高5C,在90C处理10min后保留50％的酶活.酶的三维结构模拟显示,5个突变位点在植酸酶整体结构上均引入新氢键.结论:通过定向进化获得热稳定性提高的大肠杆菌Escherichia coli植酸酶突变体,对植酸酶的工业应用和研究植酸酶结构与功能关系具有重要意义.