p38MAPK基因对PM2.5染毒HK-2细胞部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响

• 作者: 李柏茹 秦双建 李闰冰 蔡颖 郑凯 曾明 肖芳 徐新云
• 来源期刊: 癌变.畸变.突变
• 关键词: p38MAPK 大气细颗粒物 人肾上皮细胞 基因沉默 癌基因 凋亡相关基因
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 129-135,142
• 页数: 8页
• 分类号: R122.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2021.02.008

摘要

目的:探讨p38MAPK基因对PM2.5染毒人肾上皮细胞(HK-2)部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响.方法:根据GenBank提供的p38MAPK mRNA序列,设计合成干扰序列,将重组慢病毒载体转染HK-2细胞,构建p38MAPK基因沉默细胞株.分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot法检测p38MAPK mRNA和蛋白的表达水平鉴定沉默效果.用50 μg/mL的PM2.5混悬液分别染毒正常HK-2细胞和38MAP基因沉默细胞24 h,利用荧光定量PCR和Western blot检测癌基因c-myc,c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2的mRNA和蛋白的相对表达水平.结果:qPCR和Western blot检测结果显示,与正常HK-2细胞比较,38MAPK基因沉默细胞中p38MAPK mRNA的表达下降了58.50％,p38MAPK蛋白表达水平下降了51.33％(P＜0.01).PM2.5混悬液对HK-2细胞和p38MAPK基因沉默HK-2细胞染毒后,qPCR检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM2.5染毒组中c-myc、c-fos、Caspase-8和Casepase-9基因表达分别升高39.89％、15.12％、19.47％和15.45％,p53和Bcl-2基因表达分别下降21.54％和31.77％,差异均具有统计学意义(P＜0.05);与正常HK-2细胞PM25染毒组比较,38MAPK基因沉默HK-2细胞PM2.5染毒组中c-myc、c-fos、p53、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达分别下降了84.55％、63.55％、34.49％、37.19％和54.97％,差异均具有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM2.5染毒组中的c-myc和Caspase-8蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;与正常HK-2细胞PM2.5染毒组比较,38MAPK基因沉默HK-2细胞PM2.5染毒组中的c-myc、Caspase-8和Bcl-2蛋白表达减少(均为P＜0.05).结论:成功构建了38MAPK基因沉默细胞株,PM2.5可引起HK-2细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平升高,38MAPK基因可能参与PM2.5对HK-2细胞的毒性作用过程.