甲醛固定石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织蛋白提取方法的比较

• 作者: 焦叶林 赵云岗 刘其伟 阮豪杰 高社干 齐义军
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 甲醛固定 石蜡包埋 蛋白提取 蛋白纯化 免疫印迹法
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 141-145
• 页数: 5页
• 分类号: R-735.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.01.023

摘要

目的 探讨从甲醛固定石蜡包埋(FFPE)食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中高效率提取蛋白质的方法.方法 6种裂解液和100℃、105℃两种条件分别提取8例甲醛固定石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织蛋白,Bradford法测定蛋白浓度、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blotting和免疫组织化学评价各方法提取组织蛋白的效率和质量,不同蛋白沉淀方法纯化提取蛋白.结果 Laemmli裂解液(4号)100℃处理提取癌组织蛋白效率最高,Western blotting检测癌组织中14-3-3σ蛋白表达与免疫组织化学检测结果一致;2倍体积乙腈(含0.1％三氟乙酸)沉淀FFPE提取蛋白能够降低蛋白电泳背景.结论 Laemmli裂解液100℃处理可高效提取的甲醛固定石蜡包埋组织蛋白且适用于Western blotting检测蛋白标志物分子,乙腈蛋白沉淀法能够进一步去除残余的交联蛋白质分子.