RNAi抑制小菜蛾Br-Z2/3基因对下游细胞凋亡基因表达及化蛹的影响

• 作者: 胡晓汉 田素芬 李亚勍 林硕 陈艺欣 魏辉 顾晓军 黄劲飞 王曦莹 李志华
• 来源期刊: 昆虫学报
• 关键词: 小菜蛾 Br-Z2/3 细胞凋亡基因 dsRNA RNA干扰 显微注射 化蛹
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 生理与生化|Physiology and Biochemistry
• 页码范围: 141-148
• 页数: 8页
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2021.02.001

摘要

[目的]本研究旨在构建用于小菜蛾Plutella xylostella蛹期特异表达基因Br-Z2/3 dsRNA合成的体外原核表达系统,研究RNAi抑制Br-Z2/3基因对小菜蛾Br-Z2/3和细胞凋亡基因表达及化蛹的影响.[方法]构建小菜蛾L4440-Br-Z2/3重组载体,转化大肠杆菌Escherichia coli HT115感受态细胞,经IPTG诱导大量获得Br-Z2/3 dsRNA,显微注射Br-Z2/3 dsRNA至小菜蛾4龄幼虫进行RNAi;qPCR检测干扰Br-Z2/3基因12和24 h后小菜蛾4龄幼虫Br-Z2/3及其下游细胞凋亡基因reaper,caspase-9和Gadd45g的表达量;观察并统计Br-Z2/3 RNAi后小菜蛾4龄幼虫的化蛹率、平均化蛹时间、蛹畸形率和幼虫死亡率.[结果]成功实现了 Br-Z2/3 dsRNA的原核表达.qPCR结果表明,RNAi干扰Br-Z2/3后,小菜蛾4龄幼虫Br-Z2/3基因和相关联的细胞凋亡基因reaper表达量显著下降,但caspase-9 和 Gadd45g表达量显著上升.注射Br-Z2/3 dsRNA的处理组,化蛹率显著低于对照组,且化蛹高峰期推迟,幼虫死亡率显著高于对照组且畸形蛹率增加.[结论]本研究成功构建了用于小菜蛾Br-Z2/3基因dsRNA合成的体外原核表达系统,利用显微注射法对Br-Z2/3进行RNA干扰,证明Br-Z2/3是调控小菜蛾化蛹的关键基因.