毛细管电泳法高效筛选8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶的核酸适配体

• 作者: 韩诗邈 赵丽萍 杨歌 屈锋
• 来源期刊: 色谱
• 关键词: 毛细管电泳 核酸适配体 8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶 竞争筛选 多轮筛选
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Articles
• 页码范围: 721-729
• 页数: 9页
• 分类号: O658
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1123.2020.12017

摘要

8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1)是人体中重要的功能蛋白,在修复DNA氧化性损伤过程中起关键作用.氧化应激等引起的氧化损伤易导致炎症反应的发生,对OGG1的抑制可以一定程度上起到缓解作用;对癌细胞OGG1的抑制有望作为癌症治疗的新方法.目前的研究多集中于小分子对OGG1功能的影响和调控,而OGG1的适配体筛选尚未见报道.作为功能配体,适配体具有合成简单、高亲和力及高特异性等优点.该文筛选了OGG1的核酸适配体,结合毛细管电泳高效快速的优点建立了两种基于毛细管电泳-指数富集进化(CE-SELEX)技术的筛选方法:同步竞争法和多轮筛选法.同步竞争法利用单链结合蛋白(SSB)与核酸库中单链核酸的强结合能力,与目标蛋白OGG1组成竞争体系,并通过增加SSB浓度来增加竞争筛选压力,以去除与OGG1弱结合的核酸序列,一步筛选即可获得与OGG1强结合的核酸序列.多轮筛选法在相同孵育条件和电泳条件下,经3轮筛选获得OGG1的核酸适配体.比较两种筛选方法的筛选结果,筛选结果中频次最高的3条候选核酸适配体序列一致,其解离常数(KD)值在1.71～2.64μmol/L之间.分子对接分析结果表明候选适配体1(Apt 1)可能与OGG1中具有修复氧化性损伤功能的活性口袋结合.通过对两种筛选方法的对比,证明同步竞争法更加快速高效,对其他蛋白核酸适配体筛选方法的选择具有一定的指导意义.得到的适配体有望用于OGG1功能调控,以抑制其修复功能.