犬子宫内膜基质细胞的分离培养与鉴定

• 作者: 倪珺 雷诗敏 罗丽平 谢国玉 刘序 芮荣
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 关键词: 犬 子宫内膜基质细胞 分离培养 细胞模型
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 基础兽医|BASIC VETERINARY MEDICINE
• 页码范围: 49-54
• 页数: 6页
• 分类号: S858.292
• 语种: 中文

摘要

通过优化犬子宫内膜基质细胞原代及传代培养方法来提高分离培养细胞纯度和效率,以期为犬子宫内膜相关疾病研究建立模型.采用不同浓度胶原蛋白酶消化、二次网筛过滤及差时消化法,选择细胞消化最适酶浓度,改进纯化方法,观察犬子宫内膜基质细胞的形态学和生长特性,通过免疫荧光染色鉴定分离的细胞并作图像分析,MTT法检测不同时间点的细胞活率.结果:0.5％胶原酶Ⅰ消化1 h,经400目筛网过滤可.获得大量活力较好的犬子宫内膜基质细胞,且处于发情期的子宫样本分离获得的基质细胞活力更好;细胞呈长梭形或多角形,平行或涡旋状生长,原代细胞培养2～3d基本铺满培养瓶瓶底,可进行有限的传代培养,传代细胞生长迅速并维持基本的形态不变,P9代之前细胞增殖旺盛,冷冻前后均有较高的存活率;免疫荧光法鉴定表明,所获细胞波形蛋白抗体染色阳性,角蛋白抗体染色阴性,证明确为子宫内膜基质细胞,纯度可达95％.本试验为研究犬子宫内膜相关疾病提供了理想的细胞模型.