啤酒酵母转化腺苷生成ATP的HPLC测定方法的研究

• 作者: 王金涛 邱蔚然 黄凤杰
• 来源期刊: 药物生物技术
• 关键词: 生物合成 腺苷 单磷酸腺苷 二磷酸腺苷 三磷酸腺苷 高效液相色谱法 梯度洗脱
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 149-156
• 页数: 8页
• 分类号: O657.7+2
• 语种: 中文
• DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20210208

摘要

为了建立和优化啤酒酵母转化腺苷生成三磷酸腺苷反应液中AR、AMP、ADP、ATP的分离及含量的测定方法.采用HPLC法,色谱柱:Welch Ultimate AQ-C18(250 mm×4.6mm,5μm);流动相A:0.05 mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH 6.8)-0.6％甲醇溶液(V/V=89∶ 11);流动相B:甲醇.梯度洗脱:0～ 15 min,A相100％;15 ～ 20 min,A相100％ ～ 85％,B相0％ ～ 15％;20 ～35 min,A相85％,B相15％;体积流量:1.0 mL/min;检测波长260 nm;柱温:室温;进样量:20 μL;洗脱时间:35 min.AR在0.198～7.920 μg、AMP在0.2525 ～ 10.10 μg、ADP在0.500～ 20.0 μg、ATP在0.4002 ～ 16.008 μg范围内线性关系良好,且上述4个物质间的分离度大于1.5,分离效果较好.4 ℃保存,12 h内四组分峰面积的RSD小于2.0％,低温稳定性较好.多次进样,4组分峰面积RSD小于2.0％,精密度较好.上述成分的回收率分别为97.73％,99.04％,95.36％,99.68％,对应的RSD分别为1.50％,1.91％,1.43％,1.95％.表明建立的方法准确、灵敏、简便,可应用于啤酒酵母转化腺苷生成三磷酸腺苷反应的多组分的含量测定及反应转化率计算.