刺五加皂苷E对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的影响及其机制

• 作者: 林时秀 郭冰玉 回蔷 陶凯
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 瘢痕 细胞增殖 细胞凋亡 成纤维细胞 皂苷类
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn501120-20200219-00072

摘要

目的:探讨刺五加皂苷E对人增生性瘢痕成纤维细胞（Fb）生长的影响及作用机制。方法:采用实验研究方法。收集北部战区总医院烧伤整形科2018年10月—2019年3月收治的6例增生性瘢痕患者［男1例、女5例，年龄20~51（37±8）岁］的增生性瘢痕组织，培养第3~7代人增生性瘢痕Fb用于后续实验。取细胞分为生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组，200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组，分别加入10 μL生理盐水，终物质的量浓度为100、200、400 μmol/L的刺五加皂苷E。取细胞，分为单纯小干扰RNA（siRNA）-阴性对照组、单纯siRNA-血小板反应蛋白1（THBS1）组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组，单纯siRNA-阴性对照组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞转染siRNA-阴性对照，单纯siRNA-THBS1组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞转染siRNA-THBS1，转染24 h后单纯siRNA-阴性对照组和单纯siRNA-THBS1组细胞加入10 μL生理盐水，siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞加入终物质的量浓度为400 μmol/L的刺五加皂苷E。于处理后0（即刻）、12、24、36、48 h，采用噻唑蓝法检测细胞增殖活性。取细胞分为生理盐水组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组和单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组，相应处理同前，于处理后24 h，行二苯甲亚胺染色观察细胞凋亡情况。取细胞分为生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组和单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组，相应处理同前，于处理后24 h，采用蛋白质印迹法检测细胞THBS1蛋白表达水平。以上实验每组各时间点样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、独立样本 t检验、Bonferroni校正。 结果:处理后0 h，生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组，200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值相近（ P＞0.05）。处理后12、24、36、48 h，100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值均明显低于生理盐水组（ t=7.64、28.94、13.69、5.87，6.96、22.83、14.75、11.52，21.09、20.15、29.52、23.12， P＜0.05或 P＜0.01）。处理后0 h，单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值相近（ P＞0.05）；处理后12、24、36、48 h，单纯siRNA-THBS1组，siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值明显低于单纯siRNA-阴性对照组（ t=7.14、44.87、20.67、40.98，9.26、11.08、15.33、20.56， P＜0.05或 P＜0.01）；单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组与siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值相近（ P>0.05）。处理后24 h，与生理盐水组比较，200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量增加。处理后24 h，与单纯siRNA-阴性对照组比较，单纯siRNA-THBS1组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量增加；单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量相近。处理后24 h，100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞THBS1蛋白水平（0.87±0.12、0.38±0.07、0.20±0.09）均明显低于生理盐水组（1.83±0.17， t＝16.61、16.17、17.29， P<0.01）。处理后24 h，单纯siRNA-THBS1组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞THBS1蛋白水平（0.61±0.07、0.58±0.07）均明显低于单纯siRNA-阴性对照组（1.86±0.07， t＝71.06、83.80， P<0.01）；单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组（0.63±0.11）细胞THBS1蛋白水平相近（ P＞0.05）。 结论:刺五加皂苷E能够通过下调人增生性瘢痕Fb中THBS1蛋白表达，发挥抑制人增生性瘢痕Fb生长的作用。