重组白喉毒素与血管内皮生长因子融合蛋白治疗裸鼠肿瘤模型的效果

• 作者: 陆瑾 梁红远 吴丽娜 瞿爱东
• 来源期刊: 国际生物制品学杂志
• 关键词: 白喉毒素 血管内皮生长因子类 重组融合蛋白质类 免疫毒素类
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 治疗制品
• 页码范围: 206-210
• 页数: 5页
• 分类号: Q812
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20210108-00002

摘要

目的:构建重组白喉毒素(diphtheria toxin，DT)与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)融合蛋白，研究其对裸鼠肿瘤模型的治疗效果。方法:采用PCR扩增法从人外周血淋巴细胞cDNA中获取编码含8—110位氨基酸片段的 VEGF8-110基因，并从 DT基因中扩增得到编码含1—384位氨基酸片段的 DT384基因，将目的基因克隆到质粒载体pET9a中，构建重组表达质粒，转化大肠埃希菌BL21-Plys菌株表达重组蛋白，通过阴离子交换层析和分子筛层析纯化。将滴有融合蛋白的滤纸放到暴露的鸡胚绒毛尿囊膜上，孵育24 h后，观察融合蛋白对鸡胚绒毛尿囊膜的影响。对接种肿瘤1周后的裸鼠进行尾静脉注射治疗，第21天处死裸鼠取下肿瘤，测量其体积和质量，观察融合蛋白对裸鼠肿瘤模型的治疗效果。 结果:重组质粒经测序鉴定构建正确。融合蛋白在大肠埃希菌中以包涵体形式表达，包涵体具有高效的复性效果。DT 384-VEGF 8-110融合蛋白无法抑制鸡胚绒毛尿囊膜上的血管生长，DT 384-(VEGF 8-110) 2融合蛋白可以抑制鸡胚绒毛尿囊膜上的血管生长，也可抑制裸鼠肿瘤生长。经DT 384-(VEGF 8-110) 2融合蛋白治疗接种Bxpc3胰腺癌细胞的裸鼠，其肿瘤平均质量( t＝5.908， P<0.001)和平均肿瘤体积( t＝4.619， P<0.001)均小于对照组，且差异有统计学意义。 结论:DT 384-(VEGF 8-110) 2融合蛋白能够有效抑制裸鼠肿瘤生长。