vicK基因ATP结合位点对变异链球菌生物学功能的影响

• 作者: 黄珊珊 宋秀宇 徐巧丽 饶慧华 张加勤
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 关键词: 变异链球菌 vicK基因 ATP结合位点 Cre/loxP系统 双组分信号传导系统
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究|Experimental Studies
• 页码范围: 435-443
• 页数: 9页
• 分类号: R378.1+2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2020.00.182

摘要

目的 构建变异链球菌UA159 vicKATP缺失突变株,研究vicK基因ATP结合位点对变异链球菌生长、产酸耐酸、细胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)和生物膜形成等生物学功能的影响.方法 quick change法构建vicKATP缺失突变质粒,同时引入SmalI,SmalI插入kan基因盒(lox71-kan-lox66),建立vicK ATP缺失同源重组载体.所获载体转化变异链球菌,卡那霉素筛选阳性菌.pCrePA质粒转化阳性菌,30℃移除kan基因,37℃去除pCrePA,同源重组法获得无标记基因组vicKATP缺失突变株.表达纯化VicKATP缺失蛋白,并验证其ATP激酶活性.结果 成功构建UA159 vicKATP缺失突变株和补偿株.vicKATP突变株生长速率和pH值下降均较野生株缓慢;实验株随致死性酸处理时间延长,生存率呈下降趋势,但突变株生存率较野生株高,即耐酸性增强;突变株EPS和生物膜形成较野生株明显减少.结论 vicK基因ATP结合位点对变异链球菌的生长、产酸、酸耐受、EPS和生物膜形成起着重要调控作用.