Copine-3-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白在细胞中的表达和定位

• 作者: 李游 徐丽明 张琦敏 杨素芳 卢春花
• 来源期刊: 解剖学报
• 关键词: Copine-3 真核表达 支气管上皮细胞 免疫荧光 免疫印迹法 人
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 细胞和分子生物学|Cell and Molecular Biology
• 页码范围: 384-390
• 页数: 7页
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.009

摘要

目的 构建增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)-N1-CPNE3真核表达载体,检测Copine-3蛋白在细胞中的表达和定位.方法 利用RT-PCR从人支气管上皮细胞(HBE)中扩增得到编码Copine-3蛋白的CPNE3基因,并亚克隆至pEGFP-N1真核表达载体.将酶切鉴定和测序正确的pEGFP-N1-CPNE3重组质粒转染293T和H1299细胞.激光扫描共焦检测Copine-3-EGFP融合蛋白的细胞定位,Western blotting检测亚细胞组分中Copine-3蛋白的表达,免疫组织化学检测肺腺癌患者癌临床样品中的Copine-3蛋白定位.结果 编码Copine-3蛋白的CPNE3基因克隆到了 pEGFP-N1真核表达载体中,并在293T和H1299细胞中表达.通过免疫荧光染色、Western blotting和免疫组织化学确定Copine-3蛋白定位于细胞质和细胞核.结论 成功构建pEGFP-N1-CPNE3真核表达载体,Copine-3蛋白定位于细胞质和细胞核.