三结构域蛋白28通过上皮-间充质转化对肝癌细胞侵袭迁移的影响

• 作者: 张旭 苑伟 翟淑萍 袁辉 毛本亮 王鹏珍 王百林
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 癌，肝细胞 侵袭 迁移
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 63-66
• 页数: 4页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn421213-20200523-01167

摘要

目的:观察沉默三结构域蛋白28(TRIM28)表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:通过RNA干扰技术(RNAi)构建干扰TRIM28表达的短发卡RNA(shRNA)质粒，对高表达TRIM28的肝癌细胞株HepG2和人高转移肝癌细胞(HCCLM3细胞)对照组及实验组转染shRNA 48 h后，应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TRIM28基因沉默效率。应用划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测TRIM28基因沉默对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响，并通过RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)表达。使用SPSS 19.0软件进行统计学分析，组间比较采用 t检验。 结果:RT-qPCR结果显示实验组TRIM28表达(HepG2 0.84±0.02，HCCLM3 0.69±0.02)在两组肝癌细胞中均低于对照组(HepG2 1.00±0.05，HCCLM3 1.00±0.07， t＝5.488、7.240， P<0.01)，差异有统计学意义。划痕实验结果显示，48 h实验组HepG2和HCCLM3细胞迁移率[(57.83±0.02)%、(21.52±0.05)%]均明显低于对照组[(94.96±0.02)%、(38.10±0.03)%]，差异有统计学意义( t＝22.971、5.780， P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示，相应实验组穿膜细胞数分别为(57.88±5.24)、(3.33±1.36)个，明显低于对照组(265.52±9.31)、(26.03±3.13)个，差异有统计学意义( t＝23.050、13.242， P<0.01)。Western blot结果显示，HepG2和HCCLM3细胞N-cadherin蛋白表达量(0.31±0.06，0.63±0.08， t＝4.822、2.951， P<0.05)、Vimentin(0.41±0.03，0.32±0.02， t＝2.909、7.944， P<0.05)及β-catenin(0.10±0.03，0.12±0.02， t＝2.970、4.157， P<0.05)低于对照组，E-cadherin表达升高(0.25±0.05，0.27±0.07， t＝3.242、5.021， P<0.05)，差异有统计学意义。RT-qPCR结果显示，实验组E-cadherin表达高于对照组(1.80±0.30，1.40±0.17， t＝4.571、3.095， P<0.01)，差异有统计学意义，N-cadherin(0.42±0.01，0.84±0.03， t＝22.460、8.441， P<0.01)、Vimentin(0.18±0.00，0.84±0.02， t＝52.230、6.194， P<0.01)及β-catenin表达低于对照组(0.72±0.07，0.34±0.07， t＝2.972、4.174， P<0.01)，差异均有统计学意义。 结论:降低TRIM28表达能抑制肝癌细胞HepG2和HCCLM3的侵袭和迁移能力。