鸡原始生殖细胞转染条件优化

• 作者: 邹娴 何燕华 何静怡 王艳 舒鼎铭 罗成龙
• 来源期刊: 遗传
• 关键词: 鸡 原始生殖细胞 稳定转染 脂质体
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法|Technique and Method
• 页码范围: 280-288
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16288/j.yczz.20-212

摘要

为获得鸡原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的最佳转染效率,本研究比较不同质粒用量和不同细胞数在3种转染试剂(Lipofectamine 2000、3000和LTX&Plus Reagent)中PGCs的转染效率,利用荧光激活细胞分选技术(fluorescence activated cell sorting technology,FACS)辅助优化Lipofectamine 3000转染试剂,经FACS进一步分选获得带绿色荧光蛋白(GFP)的PGCs,继续培养3周后,移植回注到受体鸡胚中,移植3.5 d后分离性腺拍照观察.结果显示,转染试剂Lipofectamine 3000的转染效率最高,质粒、Lipofectamine 3000转染试剂和PGCs细胞数的配比为3μg:4μL:0.5×104个,转染5 h转染效率最高,达到23.4％,与现有的研究结果相比提高了2倍以上.移植回注PGCs到受体鸡胚中,荧光显微镜观察到鸡胚性腺中有GFP阳性细胞.本研究综合考虑转染试剂、质粒用量和细胞数量的影响因素以优化PGCs的转染条件,为高效制备转基因鸡及基因编辑鸡的研究奠定基础.